国际检验医学杂志
國際檢驗醫學雜誌
국제검험의학잡지
INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY MEDICINE
2012年
6期
645-647
,共3页
郭跃辉%刘立宾%徐芒华%郭竹英%姜斌%李伟%高丰厚
郭躍輝%劉立賓%徐芒華%郭竹英%薑斌%李偉%高豐厚
곽약휘%류립빈%서망화%곽죽영%강빈%리위%고봉후
非编码小RNA%生物素化探针%液相杂交%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳
非編碼小RNA%生物素化探針%液相雜交%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
비편마소RNA%생물소화탐침%액상잡교%비변성취병희선알응효전영
目的 建立生物素标记探针-液相杂交-非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测非编码小RNA(sRNA)的方法.方法 将生物素标记的sRNA U6寡核苷酸探针经非变性PAGE电泳后转印至尼龙膜上,然后用辣根过氧化物酶(HRP)耦联链霉亲和素进行检测.从细胞中提取总RNA,用已标记U6探针优化液相杂交退火条件及杂交缓冲液;用建立的方法 检测并计算BEAS-2B、A549细胞中sRNA U6与miRNA145的含量.结果 将Biotin-11-dUTP成功标记至寡核苷酸上,随着寡核苷酸浓度增加,检测信号强度越强,10 μmol/L时达到最强.采用水浴反应条件与采用聚合酶链反应(PCR)仪梯次降温反应条件下得到的杂化链无明显差异;以磷酸盐缓冲液作为杂交缓冲液优于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549细胞5 μg RNA中U6含量接近;BEAS-2B细胞中miRNA145绝对含量高于A549细胞.结论 成功建立并优化了sRNA检测新方法,为简单、易行、可靠地检测sRNA提供了可能.
目的 建立生物素標記探針-液相雜交-非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)檢測非編碼小RNA(sRNA)的方法.方法 將生物素標記的sRNA U6寡覈苷痠探針經非變性PAGE電泳後轉印至尼龍膜上,然後用辣根過氧化物酶(HRP)耦聯鏈黴親和素進行檢測.從細胞中提取總RNA,用已標記U6探針優化液相雜交退火條件及雜交緩遲液;用建立的方法 檢測併計算BEAS-2B、A549細胞中sRNA U6與miRNA145的含量.結果 將Biotin-11-dUTP成功標記至寡覈苷痠上,隨著寡覈苷痠濃度增加,檢測信號彊度越彊,10 μmol/L時達到最彊.採用水浴反應條件與採用聚閤酶鏈反應(PCR)儀梯次降溫反應條件下得到的雜化鏈無明顯差異;以燐痠鹽緩遲液作為雜交緩遲液優于Tris-HCl、DEPC水;BEAS-2B、A549細胞5 μg RNA中U6含量接近;BEAS-2B細胞中miRNA145絕對含量高于A549細胞.結論 成功建立併優化瞭sRNA檢測新方法,為簡單、易行、可靠地檢測sRNA提供瞭可能.
목적 건립생물소표기탐침-액상잡교-비변성취병희선알응효전영(PAGE)검측비편마소RNA(sRNA)적방법.방법 장생물소표기적sRNA U6과핵감산탐침경비변성PAGE전영후전인지니룡막상,연후용랄근과양화물매(HRP)우련련매친화소진행검측.종세포중제취총RNA,용이표기U6탐침우화액상잡교퇴화조건급잡교완충액;용건립적방법 검측병계산BEAS-2B、A549세포중sRNA U6여miRNA145적함량.결과 장Biotin-11-dUTP성공표기지과핵감산상,수착과핵감산농도증가,검측신호강도월강,10 μmol/L시체도최강.채용수욕반응조건여채용취합매련반응(PCR)의제차강온반응조건하득도적잡화련무명현차이;이린산염완충액작위잡교완충액우우Tris-HCl、DEPC수;BEAS-2B、A549세포5 μg RNA중U6함량접근;BEAS-2B세포중miRNA145절대함량고우A549세포.결론 성공건립병우화료sRNA검측신방법,위간단、역행、가고지검측sRNA제공료가능.
