蚕业科学
蠶業科學
잠업과학
ACTA SERICOLOGICA SINICA
2012年
2期
204-209
,共6页
羿德磊%王海朋%崔为正%袁传忠%王洪利
羿德磊%王海朋%崔為正%袁傳忠%王洪利
예덕뢰%왕해붕%최위정%원전충%왕홍리
桑树%原生质体%分离材料%酶液组合%渗透压调节剂%酶解温度%酶解时间
桑樹%原生質體%分離材料%酶液組閤%滲透壓調節劑%酶解溫度%酶解時間
상수%원생질체%분리재료%매액조합%삼투압조절제%매해온도%매해시간
为了分离获取高产量、高活力的桑树原生质体,分别以桑树的组培苗细切叶片、胚性悬浮培养细胞、粗切愈伤组织和细切愈伤组织等为材料,采用正交试验和单因素试验的方法对桑树原生质体酶解分离条件中的分离酶液组合、渗透压调节剂、酶解温度、酶解时间等因素进行优化.最佳分离酶液组合为100 U/mL纤维素酶R-10+ 150 U/mL果胶酶Y-23+6 U/mL离析酶R-10+细胞-原生质体洗液(1 480 mg/L CaCl2 ·2H2O,27.2 mg/L KH2PO4),以0.6 mol/L甘露醇为渗透压调节剂,在28℃酶解温度条件下酶解6h,用桑树胚性悬浮培养细胞作分离材料可获得7.8×106个/g的原生质体产量,且原生质体活力达91.4％.研究结果显示,选择合适的分离材料以及酶解分离条件是高效获取高活力桑树原生质体的关键.
為瞭分離穫取高產量、高活力的桑樹原生質體,分彆以桑樹的組培苗細切葉片、胚性懸浮培養細胞、粗切愈傷組織和細切愈傷組織等為材料,採用正交試驗和單因素試驗的方法對桑樹原生質體酶解分離條件中的分離酶液組閤、滲透壓調節劑、酶解溫度、酶解時間等因素進行優化.最佳分離酶液組閤為100 U/mL纖維素酶R-10+ 150 U/mL果膠酶Y-23+6 U/mL離析酶R-10+細胞-原生質體洗液(1 480 mg/L CaCl2 ·2H2O,27.2 mg/L KH2PO4),以0.6 mol/L甘露醇為滲透壓調節劑,在28℃酶解溫度條件下酶解6h,用桑樹胚性懸浮培養細胞作分離材料可穫得7.8×106箇/g的原生質體產量,且原生質體活力達91.4％.研究結果顯示,選擇閤適的分離材料以及酶解分離條件是高效穫取高活力桑樹原生質體的關鍵.
위료분리획취고산량、고활력적상수원생질체,분별이상수적조배묘세절협편、배성현부배양세포、조절유상조직화세절유상조직등위재료,채용정교시험화단인소시험적방법대상수원생질체매해분리조건중적분리매액조합、삼투압조절제、매해온도、매해시간등인소진행우화.최가분리매액조합위100 U/mL섬유소매R-10+ 150 U/mL과효매Y-23+6 U/mL리석매R-10+세포-원생질체세액(1 480 mg/L CaCl2 ·2H2O,27.2 mg/L KH2PO4),이0.6 mol/L감로순위삼투압조절제,재28℃매해온도조건하매해6h,용상수배성현부배양세포작분리재료가획득7.8×106개/g적원생질체산량,차원생질체활력체91.4％.연구결과현시,선택합괄적분리재료이급매해분리조건시고효획취고활력상수원생질체적관건.
