CAJ | 학술논문

目的:对赖型钩体DNA疫苗包括内鞭毛蛋白基因和质粒DNA表达载体的CpG特定结构进行分析,为DNA疫苗免疫机制的阐明和提高DNA疫苗的效能奠定基础.方法:以flaB2与VR1012构建重组DNA的免疫原,对内鞭毛蛋白基因(flaB2)及质粒DNA表达载体(VR1012)全核苷酸序列进行计算机分析.以flaB2与VR1012构建重组DNA进行NZW兔免疫原实验及豚鼠保护实验.结果:flaB2共846 bp, G+C%为47.9%;赖型钩体全基因组G+C%为36.8%,内鞭毛的G+C%比基因组高;CG特定核苷酸序列共51个,平均16.59%个bp有1个;flaB2中CpG的"C”的侧翼为两个嘌呤,"G”的侧翼为两个嘧啶共3个,分别为GACGCT 1个,GACGTC 1个,GACGCC1个;质粒DNA表达载体VR1012共4914bp,G+C%为49.4%,CG特定核苷酸序列共250个,平均19.66个bp有1个,VR1012中CpG的"C”的侧翼为两个嘌呤,"G”的侧翼为两个嘧啶共16个,分别为GACGTC 5个,GACGCT 2个,GACGCC 1个,GACGTT 1个,GGCGTT 2个,GGCGCT 2个,GGCGCC 1个,AACGCT 1个,AACGCC 1个和特别重要的TGACGTCA 4个和TAACGCCA有1个,位于5′端456-463;509-516;592-599;778-785,486-493;4个TGACGTCA和1个TAACGCCA均位于5′端且相对集中.TCG分散共53个,TCGTCG共1个,位于1 873-1 878,NZW兔免疫原实验及豚鼠保护实验的结果表明,加强注射接种后3周"VR1012+flaB2”组动物抗体效价增高(16倍),试验组存活率为90%.结论:研究结果表明赖型钩端螺旋体内鞭毛蛋白基因及其质粒DNA表达载体构成的DNA疫苗具有明显的免疫原性和免疫保护作用,经DNA分析表明DNA疫苗中特别是质粒表达载体含有TGACGTCA等特定结构,是提高DNA疫苗免疫效能,减少疫苗免疫接种剂量一种行之有效的措施.
목적:대뢰형구체DNA역묘포괄내편모단백기인화질립DNA표체재체적CpG특정결구진행분석,위DNA역묘면역궤제적천명화제고DNA역묘적효능전정기출.방법:이flaB2여VR1012구건중조DNA적면역원,대내편모단백기인(flaB2)급질립DNA표체재체(VR1012)전핵감산서렬진행계산궤분석.이flaB2여VR1012구건중조DNA진행NZW토면역원실험급돈서보호실험.결과:flaB2공846 bp, G+C%위47.9%;뢰형구체전기인조G+C%위36.8%,내편모적G+C%비기인조고;CG특정핵감산서렬공51개,평균16.59%개bp유1개;flaB2중CpG적"C”적측익위량개표령,"G”적측익위량개밀정공3개,분별위GACGCT 1개,GACGTC 1개,GACGCC1개;질립DNA표체재체VR1012공4914bp,G+C%위49.4%,CG특정핵감산서렬공250개,평균19.66개bp유1개,VR1012중CpG적"C”적측익위량개표령,"G”적측익위량개밀정공16개,분별위GACGTC 5개,GACGCT 2개,GACGCC 1개,GACGTT 1개,GGCGTT 2개,GGCGCT 2개,GGCGCC 1개,AACGCT 1개,AACGCC 1개화특별중요적TGACGTCA 4개화TAACGCCA유1개,위우5′단456-463;509-516;592-599;778-785,486-493;4개TGACGTCA화1개TAACGCCA균위우5′단차상대집중.TCG분산공53개,TCGTCG공1개,위우1 873-1 878,NZW토면역원실험급돈서보호실험적결과표명,가강주사접충후3주"VR1012+flaB2”조동물항체효개증고(16배),시험조존활솔위90%.결론:연구결과표명뢰형구단라선체내편모단백기인급기질립DNA표체재체구성적DNA역묘구유명현적면역원성화면역보호작용,경DNA분석표명DNA역묘중특별시질립표체재체함유TGACGTCA등특정결구,시제고DNA역묘면역효능,감소역묘면역접충제량일충행지유효적조시.