四川大学学报（医学版）
四川大學學報（醫學版）
사천대학학보（의학판）
JOURNAL OF SICHUAN UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)
2006年
4期
497-501
,共5页
王艳萍%唐小军%陈晓禾%车国卫%朱大兴%孙芝琳%周清华
王豔萍%唐小軍%陳曉禾%車國衛%硃大興%孫芝琳%週清華
왕염평%당소군%진효화%차국위%주대흥%손지림%주청화
人端粒酶催化亚单位%启动子%靶向转录%肺癌
人耑粒酶催化亞單位%啟動子%靶嚮轉錄%肺癌
인단립매최화아단위%계동자%파향전록%폐암
目的克隆人端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子序列片段,并探讨hTERT启动子在肿瘤细胞中的靶向转录活性.方法用PCR方法克隆293细胞DNA hTERT 5'端上游旁侧序列长约1.1 kb的启动子片段,经测序无误后将其克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游,构建pGL3-hTERTp重组质粒,瞬时转染肺癌细胞A549、SPC-A-1、LTEPα-2、NCI-H446、YTMLC-9、GLC-82、95D、A2以及正常成纤维细胞MRC-5,检测荧光素酶活性.并用RT-PCR和TRAP -ELISA方法分析各细胞hTERT mRNA的表达及其端粒酶活性.结果琼脂糖电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1.1 kb,DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致,位于hTERT基因转录起始位点上游1126 bp (-1126～-40),片段长度为1084 bp;采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒,均显示构建成功;hTERT mRNA和端粒酶活性在肺癌细胞中呈不同水平的表达,而正常细胞则均为阴性;瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示,hTERT启动子片段在所有检测的肺癌细胞中均有高低不同的转录活性, 在正常细胞MRC-5无转录活性.结论克隆的1084 bp大小的hTERT启动子片段在hTERTmRNA和端粒酶阳性的肺癌细胞中有特异性的转录活性, hTERT启动子可能作为靶向性基因治疗的调控元件.
目的剋隆人耑粒酶催化亞單位(hTERT)啟動子序列片段,併探討hTERT啟動子在腫瘤細胞中的靶嚮轉錄活性.方法用PCR方法剋隆293細胞DNA hTERT 5'耑上遊徬側序列長約1.1 kb的啟動子片段,經測序無誤後將其剋隆入熒光素酶報告質粒pGL3-Basic的熒光素酶基因上遊,構建pGL3-hTERTp重組質粒,瞬時轉染肺癌細胞A549、SPC-A-1、LTEPα-2、NCI-H446、YTMLC-9、GLC-82、95D、A2以及正常成纖維細胞MRC-5,檢測熒光素酶活性.併用RT-PCR和TRAP -ELISA方法分析各細胞hTERT mRNA的錶達及其耑粒酶活性.結果瓊脂糖電泳顯示PCR剋隆的hTERT啟動子片段長約1.1 kb,DNA測序結果與GenBank中hTERT啟動子DNA序列完全一緻,位于hTERT基因轉錄起始位點上遊1126 bp (-1126～-40),片段長度為1084 bp;採用雙酶切和PCR兩種方法鑒定pGL3-hTERTp重組質粒,均顯示構建成功;hTERT mRNA和耑粒酶活性在肺癌細胞中呈不同水平的錶達,而正常細胞則均為陰性;瞬時轉染及熒光素酶活性檢測實驗顯示,hTERT啟動子片段在所有檢測的肺癌細胞中均有高低不同的轉錄活性, 在正常細胞MRC-5無轉錄活性.結論剋隆的1084 bp大小的hTERT啟動子片段在hTERTmRNA和耑粒酶暘性的肺癌細胞中有特異性的轉錄活性, hTERT啟動子可能作為靶嚮性基因治療的調控元件.
목적극륭인단립매최화아단위(hTERT)계동자서렬편단,병탐토hTERT계동자재종류세포중적파향전록활성.방법용PCR방법극륭293세포DNA hTERT 5'단상유방측서렬장약1.1 kb적계동자편단,경측서무오후장기극륭입형광소매보고질립pGL3-Basic적형광소매기인상유,구건pGL3-hTERTp중조질립,순시전염폐암세포A549、SPC-A-1、LTEPα-2、NCI-H446、YTMLC-9、GLC-82、95D、A2이급정상성섬유세포MRC-5,검측형광소매활성.병용RT-PCR화TRAP -ELISA방법분석각세포hTERT mRNA적표체급기단립매활성.결과경지당전영현시PCR극륭적hTERT계동자편단장약1.1 kb,DNA측서결과여GenBank중hTERT계동자DNA서렬완전일치,위우hTERT기인전록기시위점상유1126 bp (-1126～-40),편단장도위1084 bp;채용쌍매절화PCR량충방법감정pGL3-hTERTp중조질립,균현시구건성공;hTERT mRNA화단립매활성재폐암세포중정불동수평적표체,이정상세포칙균위음성;순시전염급형광소매활성검측실험현시,hTERT계동자편단재소유검측적폐암세포중균유고저불동적전록활성, 재정상세포MRC-5무전록활성.결론극륭적1084 bp대소적hTERT계동자편단재hTERTmRNA화단립매양성적폐암세포중유특이성적전록활성, hTERT계동자가능작위파향성기인치료적조공원건.
