天津医药
天津醫藥
천진의약
TIANJIN MEDICAL JOURNAL
2008年
3期
212-214,242
,共4页
绿色荧光蛋白质类%基因表达%大肠杆菌%质粒%Exendin-4%胰高血糖素样肽-1受体
綠色熒光蛋白質類%基因錶達%大腸桿菌%質粒%Exendin-4%胰高血糖素樣肽-1受體
록색형광단백질류%기인표체%대장간균%질립%Exendin-4%이고혈당소양태-1수체
目的:表达具有双功能特性的Exendin-4-GFP融合蛋白.方法:构建融合表达载体pET21a(+)/Exendin-4-GFP,转化大肠杆菌BL21后,以IPTG诱导融合蛋白的表达,并利用镍金属螯合层析树脂对其进行纯化.采用胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)转染的CHO细胞考察融合蛋白的结合特性,并检测其生物活性.结果:含有融合表达载体的重组菌株诱导表达后,经SDS-PAGE及免疫印迹分析显示,31.0 ku的融合蛋白在大肠杆菌中得到了表达,且具有Exendin-4的抗原活性.受体结合实验表明,该融合蛋白能够与GLP-1R特异性结合,在488 nm激发光下呈现绿色荧光.体内活性实验表明,融合蛋白具有明显的降血糖活性.结论:本研究表达的Exendin-4-GFP融合蛋白同时具有Exendin-4的活性和荧光特性,为研究GLP-1受体功能以及Exendin-4与细胞相互作用的机制奠定了基础.
目的:錶達具有雙功能特性的Exendin-4-GFP融閤蛋白.方法:構建融閤錶達載體pET21a(+)/Exendin-4-GFP,轉化大腸桿菌BL21後,以IPTG誘導融閤蛋白的錶達,併利用鎳金屬螯閤層析樹脂對其進行純化.採用胰高血糖素樣肽-1受體(GLP-1R)轉染的CHO細胞攷察融閤蛋白的結閤特性,併檢測其生物活性.結果:含有融閤錶達載體的重組菌株誘導錶達後,經SDS-PAGE及免疫印跡分析顯示,31.0 ku的融閤蛋白在大腸桿菌中得到瞭錶達,且具有Exendin-4的抗原活性.受體結閤實驗錶明,該融閤蛋白能夠與GLP-1R特異性結閤,在488 nm激髮光下呈現綠色熒光.體內活性實驗錶明,融閤蛋白具有明顯的降血糖活性.結論:本研究錶達的Exendin-4-GFP融閤蛋白同時具有Exendin-4的活性和熒光特性,為研究GLP-1受體功能以及Exendin-4與細胞相互作用的機製奠定瞭基礎.
목적:표체구유쌍공능특성적Exendin-4-GFP융합단백.방법:구건융합표체재체pET21a(+)/Exendin-4-GFP,전화대장간균BL21후,이IPTG유도융합단백적표체,병이용얼금속오합층석수지대기진행순화.채용이고혈당소양태-1수체(GLP-1R)전염적CHO세포고찰융합단백적결합특성,병검측기생물활성.결과:함유융합표체재체적중조균주유도표체후,경SDS-PAGE급면역인적분석현시,31.0 ku적융합단백재대장간균중득도료표체,차구유Exendin-4적항원활성.수체결합실험표명,해융합단백능구여GLP-1R특이성결합,재488 nm격발광하정현록색형광.체내활성실험표명,융합단백구유명현적강혈당활성.결론:본연구표체적Exendin-4-GFP융합단백동시구유Exendin-4적활성화형광특성,위연구GLP-1수체공능이급Exendin-4여세포상호작용적궤제전정료기출.
