细胞生物学杂志
細胞生物學雜誌
세포생물학잡지
CHINESE JOURNAL OF CELL BIOLOGY
2008年
2期
201-205
,共5页
刘莉%采克俊%张易祥%何湃%丁志丽%张念慈
劉莉%採剋俊%張易祥%何湃%丁誌麗%張唸慈
류리%채극준%장역상%하배%정지려%장념자
MxA基因%转染%表达%鸡细胞
MxA基因%轉染%錶達%鷄細胞
MxA기인%전염%표체%계세포
将人抗病毒蛋白基因MxA与携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的真核表达质粒重组后构建MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA.经PCR和酶切方法鉴定后,重组质粒在脂质体介导下转染鸡成纤维细胞和睾丸组织原代细胞,通过荧光观察,RT-PCR及细胞免疫组化检测目的基因的表达.结果表明,MxA基因片段已经被克隆到pEGFP-C1表达载体,成功构建了MxA基因真核表达载体pEGFP-C1-MxA.经该重组质粒转染后的鸡细胞的胞质中呈现颗粒状分布的绿色荧光,RT-PCR扩增出EGFP和MxA基因的特异性片断,免疫组化结果显示EGFP报告基因在细胞内的阳性表达,并表现出MxA的表达特征,间接证明了MxA可在鸡细胞中表达.MxA基因真核表达载体的成功构建以及在鸡细胞中的表达为进一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的应用打下了基础.
將人抗病毒蛋白基因MxA與攜帶增彊型綠色熒光蛋白(EGFP)基因的真覈錶達質粒重組後構建MxA基因真覈錶達載體pEGFP-C1-MxA.經PCR和酶切方法鑒定後,重組質粒在脂質體介導下轉染鷄成纖維細胞和睪汍組織原代細胞,通過熒光觀察,RT-PCR及細胞免疫組化檢測目的基因的錶達.結果錶明,MxA基因片段已經被剋隆到pEGFP-C1錶達載體,成功構建瞭MxA基因真覈錶達載體pEGFP-C1-MxA.經該重組質粒轉染後的鷄細胞的胞質中呈現顆粒狀分佈的綠色熒光,RT-PCR擴增齣EGFP和MxA基因的特異性片斷,免疫組化結果顯示EGFP報告基因在細胞內的暘性錶達,併錶現齣MxA的錶達特徵,間接證明瞭MxA可在鷄細胞中錶達.MxA基因真覈錶達載體的成功構建以及在鷄細胞中的錶達為進一步研究MxA基因在抗禽病毒性疾病中的應用打下瞭基礎.
장인항병독단백기인MxA여휴대증강형록색형광단백(EGFP)기인적진핵표체질립중조후구건MxA기인진핵표체재체pEGFP-C1-MxA.경PCR화매절방법감정후,중조질립재지질체개도하전염계성섬유세포화고환조직원대세포,통과형광관찰,RT-PCR급세포면역조화검측목적기인적표체.결과표명,MxA기인편단이경피극륭도pEGFP-C1표체재체,성공구건료MxA기인진핵표체재체pEGFP-C1-MxA.경해중조질립전염후적계세포적포질중정현과립상분포적록색형광,RT-PCR확증출EGFP화MxA기인적특이성편단,면역조화결과현시EGFP보고기인재세포내적양성표체,병표현출MxA적표체특정,간접증명료MxA가재계세포중표체.MxA기인진핵표체재체적성공구건이급재계세포중적표체위진일보연구MxA기인재항금병독성질병중적응용타하료기출.
