CAJ | 학술논문

背景:动物和人外周血中分离出的间充质干细胞生长繁殖受分离方法、培养条件等因素的影响.目的:采用重组人粒细胞集落刺激因子动员小鼠外周血间充质干细胞,体外培养条件中加入鼠尾胶包被,观察其对细胞分离、培养、增殖的影响.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-05/2007-12在郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所完成.材料:昆明小鼠20只随机分为鼠尾胶包被组和不包被对照组,每组10只.方法:小鼠皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子80μg/(kg·d)连续动员5d,最后一次注射后6h取外周血.肝素抗凝后,采用全血细胞分离培养,用含体积分数为0.15胎牛血清DMEM培养基,分别接种于包被和未包被鼠尾胶的12孔板,接种密度为1×105/孔,48h后半量换液以后每3天换液1次,培养10d.主要观察指标:[1]鼠尾胶包被的培养板对形成成纤维样细胞集落的影响.[2]成纤维样细胞集落中的间充质干细胞表面标记流式检测结果.[3]成纤维样细胞集落成骨、成脂肪诱导后嗜银法和油红O法染色鉴定.结果:[1]使用鼠尾胶包被的培养板可增加重组人粒细胞集落刺激因子动员后外周血成纤维样细胞集落出现的频率(P＜0.05).[2]经流式细胞术鉴定形成成纤维样细胞集落的细胞不表达CD34、CD133,表达CD90、CD105.[3]成骨、成脂肪诱导后细胞嗜银法和油红0法染色鉴定均呈阳性.结论:培养的细胞符合公认间充质干细胞的特征,鼠尾胶可增加培养皿的黏附性促进间充质干细胞分离.
배경:동물화인외주혈중분리출적간충질간세포생장번식수분리방법、배양조건등인소적영향.목적:채용중조인립세포집락자격인자동원소서외주혈간충질간세포,체외배양조건중가입서미효포피,관찰기대세포분리、배양、증식적영향.설계、시간급지점:개방성실험,우2005-05/2007-12재운양의학원부속인민의원림상의학연구소완성.재료:곤명소서20지수궤분위서미효포피조화불포피대조조,매조10지.방법:소서피하주사중조인립세포집락자격인자80μg/(kg·d)련속동원5d,최후일차주사후6h취외주혈.간소항응후,채용전혈세포분리배양,용함체적분수위0.15태우혈청DMEM배양기,분별접충우포피화미포피서미효적12공판,접충밀도위1×105/공,48h후반량환액이후매3천환액1차,배양10d.주요관찰지표:[1]서미효포피적배양판대형성성섬유양세포집락적영향.[2]성섬유양세포집락중적간충질간세포표면표기류식검측결과.[3]성섬유양세포집락성골、성지방유도후기은법화유홍O법염색감정.결과:[1]사용서미효포피적배양판가증가중조인립세포집락자격인자동원후외주혈성섬유양세포집락출현적빈솔(P＜0.05).[2]경류식세포술감정형성성섬유양세포집락적세포불표체CD34、CD133,표체CD90、CD105.[3]성골、성지방유도후세포기은법화유홍0법염색감정균정양성.결론:배양적세포부합공인간충질간세포적특정,서미효가증가배양명적점부성촉진간충질간세포분리.