细胞与分子免疫学杂志
細胞與分子免疫學雜誌
세포여분자면역학잡지
2008年
7期
710-713
,共4页
杨振%宋振%安宁%王劼%郭霭光%雷鸣%郭泽坤
楊振%宋振%安寧%王劼%郭靄光%雷鳴%郭澤坤
양진%송진%안저%왕할%곽애광%뢰명%곽택곤
人SUMO-2%原核表达%蛋白纯化%抗血清
人SUMO-2%原覈錶達%蛋白純化%抗血清
인SUMO-2%원핵표체%단백순화%항혈청
目的:构建人SUMO-2基因的原核表达载体,纯化融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2并以其为抗原免疫家兔,制备人SUMO-2多克隆抗体.方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因并克隆至pET41a(+)原核表达载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS诱导融合蛋白GST-SUMO2-SUMO2表达;所获得的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE电泳鉴定后,免疫家兔制备抗血清,分别采用ELISA、Western blot检测抗体效价和特异性.结果:测序证实重组质粒pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2构建成功;SDS-PAGE结果证实获得Mr为52 000的GST-SUMO2-SUMO2融合蛋白且为可溶性蛋白;经过GST亲和层析有效纯化;以该融合蛋白免疫家兔制备得到的抗血清经Western blot检测证实能与目的蛋白发生特异性结合,ELISA检测为阳性.结论:获得了人SUMO-2蛋白及特异性多克隆抗体,对进一步研究人SUMO-2及SUMO第二类家族的功能提供了有用工具.
目的:構建人SUMO-2基因的原覈錶達載體,純化融閤蛋白GST-SUMO2-SUMO2併以其為抗原免疫傢兔,製備人SUMO-2多剋隆抗體.方法:用PCR的方法得到人SUMO-2基因併剋隆至pET41a(+)原覈錶達載體中,轉化大腸桿菌BL21(DE3)plysS誘導融閤蛋白GST-SUMO2-SUMO2錶達;所穫得的可溶性蛋白經親和層析純化、SDS-PAGE電泳鑒定後,免疫傢兔製備抗血清,分彆採用ELISA、Western blot檢測抗體效價和特異性.結果:測序證實重組質粒pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2構建成功;SDS-PAGE結果證實穫得Mr為52 000的GST-SUMO2-SUMO2融閤蛋白且為可溶性蛋白;經過GST親和層析有效純化;以該融閤蛋白免疫傢兔製備得到的抗血清經Western blot檢測證實能與目的蛋白髮生特異性結閤,ELISA檢測為暘性.結論:穫得瞭人SUMO-2蛋白及特異性多剋隆抗體,對進一步研究人SUMO-2及SUMO第二類傢族的功能提供瞭有用工具.
목적:구건인SUMO-2기인적원핵표체재체,순화융합단백GST-SUMO2-SUMO2병이기위항원면역가토,제비인SUMO-2다극륭항체.방법:용PCR적방법득도인SUMO-2기인병극륭지pET41a(+)원핵표체재체중,전화대장간균BL21(DE3)plysS유도융합단백GST-SUMO2-SUMO2표체;소획득적가용성단백경친화층석순화、SDS-PAGE전영감정후,면역가토제비항혈청,분별채용ELISA、Western blot검측항체효개화특이성.결과:측서증실중조질립pET41a(+)-SU-MO2-SUMO2구건성공;SDS-PAGE결과증실획득Mr위52 000적GST-SUMO2-SUMO2융합단백차위가용성단백;경과GST친화층석유효순화;이해융합단백면역가토제비득도적항혈청경Western blot검측증실능여목적단백발생특이성결합,ELISA검측위양성.결론:획득료인SUMO-2단백급특이성다극륭항체,대진일보연구인SUMO-2급SUMO제이류가족적공능제공료유용공구.
