现代预防医学
現代預防醫學
현대예방의학
MODERN PREVENTIVE MEDICINE
2008年
11期
2106-2108
,共3页
欧阳丹明%胡永轩%李木兰%曾晓军%何志雄%袁才佳
歐暘丹明%鬍永軒%李木蘭%曾曉軍%何誌雄%袁纔佳
구양단명%호영헌%리목란%증효군%하지웅%원재가
日本血吸虫(中国大陆株)%ATP合酶脂结合蛋白样基因%DNA疫苗%真核表达
日本血吸蟲(中國大陸株)%ATP閤酶脂結閤蛋白樣基因%DNA疫苗%真覈錶達
일본혈흡충(중국대륙주)%ATP합매지결합단백양기인%DNA역묘%진핵표체
[目的]构建日本血吸虫ATP合酶脂结合蛋白样基因(ATP synthase lipid-binding protein-like protein gene of Schistosoma japonicum, SjAslp)核酸疫苗,并观察其在真核细胞中的表达情况.[方法]根据GenBank中SjAslp cDNA全长设计特异性引物,从实验室已构建好的重组质粒pBCSK+/SjAslp中扩增出SjAslp cDNA全长,将其克隆入pUCm-T.载体,再亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)构建成日本血吸虫组织蛋白酶B肽链内切酶全基因核酸疫苗(pcDNA3.1(+)/SjAslp);经PCR、酶切及测序鉴定后,利用电穿孔将其转染HeLa细胞.采用免疫细胞化学法检测SjAslp在HeLa细胞内的表达情况.[结果]成功构建SjAslp核酸疫苗,免疫细胞化学技术检测其能在HeLa细胞浆内表达.[结论]pcDNA3.1(+)/SjAslp核酸疫苗能在真核细胞内表达,为抗日本血吸虫核酸疫苗的研制打下了必要的基础.
[目的]構建日本血吸蟲ATP閤酶脂結閤蛋白樣基因(ATP synthase lipid-binding protein-like protein gene of Schistosoma japonicum, SjAslp)覈痠疫苗,併觀察其在真覈細胞中的錶達情況.[方法]根據GenBank中SjAslp cDNA全長設計特異性引物,從實驗室已構建好的重組質粒pBCSK+/SjAslp中擴增齣SjAslp cDNA全長,將其剋隆入pUCm-T.載體,再亞剋隆入真覈錶達載體pcDNA3.1(+)構建成日本血吸蟲組織蛋白酶B肽鏈內切酶全基因覈痠疫苗(pcDNA3.1(+)/SjAslp);經PCR、酶切及測序鑒定後,利用電穿孔將其轉染HeLa細胞.採用免疫細胞化學法檢測SjAslp在HeLa細胞內的錶達情況.[結果]成功構建SjAslp覈痠疫苗,免疫細胞化學技術檢測其能在HeLa細胞漿內錶達.[結論]pcDNA3.1(+)/SjAslp覈痠疫苗能在真覈細胞內錶達,為抗日本血吸蟲覈痠疫苗的研製打下瞭必要的基礎.
[목적]구건일본혈흡충ATP합매지결합단백양기인(ATP synthase lipid-binding protein-like protein gene of Schistosoma japonicum, SjAslp)핵산역묘,병관찰기재진핵세포중적표체정황.[방법]근거GenBank중SjAslp cDNA전장설계특이성인물,종실험실이구건호적중조질립pBCSK+/SjAslp중확증출SjAslp cDNA전장,장기극륭입pUCm-T.재체,재아극륭입진핵표체재체pcDNA3.1(+)구건성일본혈흡충조직단백매B태련내절매전기인핵산역묘(pcDNA3.1(+)/SjAslp);경PCR、매절급측서감정후,이용전천공장기전염HeLa세포.채용면역세포화학법검측SjAslp재HeLa세포내적표체정황.[결과]성공구건SjAslp핵산역묘,면역세포화학기술검측기능재HeLa세포장내표체.[결론]pcDNA3.1(+)/SjAslp핵산역묘능재진핵세포내표체,위항일본혈흡충핵산역묘적연제타하료필요적기출.
