CAJ | 학술논문

目的构建重组融合蛋白TumstatinTNF-α的分泌型真核表达载体并检测其在中国仓鼠卵巢细胞(CHO-K1)中的稳定表达.方法以人胚肾293细胞为材料,提取总RNA,用RT-PCR方法合成人turristatin cDNA,将该cDNA克隆到pGEM-T载体获得重组质粒pGEM-T/tumstatin.利用PCR从pGEM-T/tumstatin和PBV220-TNF-α载体中分别扩增出sig-tumstatin-linker和linkerTNF片段,将其克隆得到sig-tumstatin-linker-TNF片段,sig-tumstatin-linker-TNF片段经酶切后,插入经同样酶切pIRESneo3质粒,利用克隆PCR、限制性内切酶消化以及序列测定对获得的sig-tumstatin-linke-TNF基因片段及重组载体进行验证.将重组sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体转染到CHO-K1对其表达状况进行检测.结果所获得的sig-tumstatin-linker-TNF片段(1.32kb)序列与报道的序列完全一致.酶切鉴定的结果表明含肿瘤抑素基因的重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF表达载体构建成功.转染重组pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF的CHO-K1表达了肿瘤抑素融合蛋白tumstatin-linker-TNF.从生长曲线结果来看,转染pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF真核表达载体和转染pIRESneo3的CHO-K1比未转染的CHO-K1细胞的生长速度要慢.结论成功地构建了重组人肿瘤抑素融合蛋白的真核表达载体,并获得能稳定表达人肿瘤抑素融合蛋白的CHO-K1.
목적 구건중조융합단백TumstatinTNF-α적분비형진핵표체재체병검측기재중국창서란소세포(CHO-K1)중적은정표체.방법 이인배신293세포위재료,제취총RNA,용RT-PCR방법합성인turristatin cDNA,장해cDNA극륭도pGEM-T재체획득중조질립pGEM-T/tumstatin.이용PCR종pGEM-T/tumstatin화PBV220-TNF-α재체중분별확증출sig-tumstatin-linker화linkerTNF편단,장기극륭득도sig-tumstatin-linker-TNF편단,sig-tumstatin-linker-TNF편단경매절후,삽입경동양매절pIRESneo3질립,이용극륭PCR、한제성내절매소화이급서렬측정대획득적sig-tumstatin-linke-TNF기인편단급중조재체진행험증.장중조sig-tumstatin-linker-TNF진핵표체재체전염도CHO-K1대기표체상황진행검측.결과 소획득적sig-tumstatin-linker-TNF편단(1.32kb)서렬여보도적서렬완전일치.매절감정적결과표명함종류억소기인적중조pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF표체재체구건성공.전염중조pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF적CHO-K1표체료종류억소융합단백tumstatin-linker-TNF.종생장곡선결과래간,전염pIRESneo3/sig-tumstatin-linker-TNF진핵표체재체화전염pIRESneo3적CHO-K1비미전염적CHO-K1세포적생장속도요만.결론 성공지구건료중조인종류억소융합단백적진핵표체재체,병획득능은정표체인종류억소융합단백적CHO-K1.