郑州大学学报(医学版)
鄭州大學學報(醫學版)
정주대학학보(의학판)
JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERISTY(MEDICAL SCIENCES)
2009年
3期
533-536
,共4页
马云云%冯龙%卫艳萍%李月白%何婷玉%董子明%赵国强
馬雲雲%馮龍%衛豔萍%李月白%何婷玉%董子明%趙國彊
마운운%풍룡%위염평%리월백%하정옥%동자명%조국강
萤光素酶报告载体pGL3%新霉素抗性基因neo%克隆
螢光素酶報告載體pGL3%新黴素抗性基因neo%剋隆
형광소매보고재체pGL3%신매소항성기인neo%극륭
目的:构建带新霉素抗性的萤光素酶报告载体.方法:设计扩增新霉素抗性基闪neo,克隆人萤光素酶报告载体pGL3,得到pGL3-neo.分别比较pGL3、pGL3-CMV promoter瞬时转染组和经G418筛选的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter稳定转染组细胞萤光素酶活性.结果:PCR扩增出neo表达单元;酶切和DNA测序分析鉴定得到带新霉素抗性的萤光索酶报告质粒pGL3-neo.G418筛选可获得稳定转染pGL3-neO)细胞株和稳定转染pGL3-neo-CMV promoter的细胞株.荧光检测显示:瞬时转染pGL3组、pGL3-CMV promoter组及稳定转染pGL3-neo组、pGL3-neo-CMV promoter组萤光素酶活性值分别为1 047±86、1 504±107和34 819±l 479、456 109 4±15 791,稳定转染组萤光素酶活性均高于瞬时转染组,P<0.05.结论:成功构建了带新霉素抗性的萤光素酶报告基因载体,使报告基因检测数据的敏感性和可靠性显著提高.
目的:構建帶新黴素抗性的螢光素酶報告載體.方法:設計擴增新黴素抗性基閃neo,剋隆人螢光素酶報告載體pGL3,得到pGL3-neo.分彆比較pGL3、pGL3-CMV promoter瞬時轉染組和經G418篩選的pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter穩定轉染組細胞螢光素酶活性.結果:PCR擴增齣neo錶達單元;酶切和DNA測序分析鑒定得到帶新黴素抗性的螢光索酶報告質粒pGL3-neo.G418篩選可穫得穩定轉染pGL3-neO)細胞株和穩定轉染pGL3-neo-CMV promoter的細胞株.熒光檢測顯示:瞬時轉染pGL3組、pGL3-CMV promoter組及穩定轉染pGL3-neo組、pGL3-neo-CMV promoter組螢光素酶活性值分彆為1 047±86、1 504±107和34 819±l 479、456 109 4±15 791,穩定轉染組螢光素酶活性均高于瞬時轉染組,P<0.05.結論:成功構建瞭帶新黴素抗性的螢光素酶報告基因載體,使報告基因檢測數據的敏感性和可靠性顯著提高.
목적:구건대신매소항성적형광소매보고재체.방법:설계확증신매소항성기섬neo,극륭인형광소매보고재체pGL3,득도pGL3-neo.분별비교pGL3、pGL3-CMV promoter순시전염조화경G418사선적pGL3-neo、pGL3-neo-CMV promoter은정전염조세포형광소매활성.결과:PCR확증출neo표체단원;매절화DNA측서분석감정득도대신매소항성적형광색매보고질립pGL3-neo.G418사선가획득은정전염pGL3-neO)세포주화은정전염pGL3-neo-CMV promoter적세포주.형광검측현시:순시전염pGL3조、pGL3-CMV promoter조급은정전염pGL3-neo조、pGL3-neo-CMV promoter조형광소매활성치분별위1 047±86、1 504±107화34 819±l 479、456 109 4±15 791,은정전염조형광소매활성균고우순시전염조,P<0.05.결론:성공구건료대신매소항성적형광소매보고기인재체,사보고기인검측수거적민감성화가고성현저제고.
