中国食品学报
中國食品學報
중국식품학보
JOURNAL OF CHINESE INSTITUTE OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY
2010年
1期
67-72
,共6页
梁锦锋%沈莲清%王向阳%顾青
樑錦鋒%瀋蓮清%王嚮暘%顧青
량금봉%침련청%왕향양%고청
西兰花%硫代葡萄糖苷酶%BoMyr2基因%毕赤酵母%分泌表达
西蘭花%硫代葡萄糖苷酶%BoMyr2基因%畢赤酵母%分泌錶達
서란화%류대포도당감매%BoMyr2기인%필적효모%분비표체
以西兰花种子总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增西兰花BoMyr2成熟蛋白基因,将目的片段连接到pMD18-T载体,测序结果显示扩增片段与目的序列一致.通过目的片段的酵母表达载体pPIC9K的构建,获得重组酵母表达载体pPIC9K-BoMyr2,经Sac Ⅰ线性化后电转导入毕赤酵母菌株(Pichia pastoris KM71).经甲醇诱导表达试验,SDS-PAGE结果显示,表达上清中含有大小约65 kD的蛋白条带,与预期分子质量大小相符.以sinigrin为底物测定表达上清的酶活性,结果显示,通过毕赤酵母KM71表达的培养液具有硫代葡萄糖苷酶活性.硫代葡萄糖苷酶在KM71中的异源表达,为进一步研究与应用提供理论基础.
以西蘭花種子總RNA為模闆,通過RT-PCR方法擴增西蘭花BoMyr2成熟蛋白基因,將目的片段連接到pMD18-T載體,測序結果顯示擴增片段與目的序列一緻.通過目的片段的酵母錶達載體pPIC9K的構建,穫得重組酵母錶達載體pPIC9K-BoMyr2,經Sac Ⅰ線性化後電轉導入畢赤酵母菌株(Pichia pastoris KM71).經甲醇誘導錶達試驗,SDS-PAGE結果顯示,錶達上清中含有大小約65 kD的蛋白條帶,與預期分子質量大小相符.以sinigrin為底物測定錶達上清的酶活性,結果顯示,通過畢赤酵母KM71錶達的培養液具有硫代葡萄糖苷酶活性.硫代葡萄糖苷酶在KM71中的異源錶達,為進一步研究與應用提供理論基礎.
이서란화충자총RNA위모판,통과RT-PCR방법확증서란화BoMyr2성숙단백기인,장목적편단련접도pMD18-T재체,측서결과현시확증편단여목적서렬일치.통과목적편단적효모표체재체pPIC9K적구건,획득중조효모표체재체pPIC9K-BoMyr2,경Sac Ⅰ선성화후전전도입필적효모균주(Pichia pastoris KM71).경갑순유도표체시험,SDS-PAGE결과현시,표체상청중함유대소약65 kD적단백조대,여예기분자질량대소상부.이sinigrin위저물측정표체상청적매활성,결과현시,통과필적효모KM71표체적배양액구유류대포도당감매활성.류대포도당감매재KM71중적이원표체,위진일보연구여응용제공이론기출.
