临床肺科杂志
臨床肺科雜誌
림상폐과잡지
JOUNAL OF CLINICAL PULMONARY MEDICINE
2011年
10期
1533-1535
,共3页
分枝杆菌%结核%Rv3425%CFP10%ESAT6
分枝桿菌%結覈%Rv3425%CFP10%ESAT6
분지간균%결핵%Rv3425%CFP10%ESAT6
目的 克隆表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-Rv3425基因片段融合蛋白并纯化,测抗原的免疫原性,为结核病的临床诊断提供有效的候选抗原.方法利用生物信息学分析免疫优势位点,设计不同引物,采用聚合酶链反应( Polymerase Chain Reaction,PCR)扩增出相应基因片段,插入pET30a表达载体,转入大肠杆菌BL21( DE3),IPTG诱导表达目的蛋白,亲和纯化后用H37Rv免疫的兔血清进行间接酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定其免疫原性.结果PCR扩增的CFP10、ESAT6和Rv33425基因片段与基因文库(Genbank)报道的完全一致.三者在大肠杆菌BL21(DE3)中融合表达的产物约为22kDa,与预计大小相吻合.Ni-NTA亲和纯化出目的蛋白.ELISA显示该蛋白具有较强的免疫原性.结论结核分枝杆菌CFP10-ESAT6-Rv3425融合基因片段的融合表达纯化后,可作为结核病免疫诊断的一个候选抗原.
目的 剋隆錶達結覈分枝桿菌CFP10-ESAT6-Rv3425基因片段融閤蛋白併純化,測抗原的免疫原性,為結覈病的臨床診斷提供有效的候選抗原.方法利用生物信息學分析免疫優勢位點,設計不同引物,採用聚閤酶鏈反應( Polymerase Chain Reaction,PCR)擴增齣相應基因片段,插入pET30a錶達載體,轉入大腸桿菌BL21( DE3),IPTG誘導錶達目的蛋白,親和純化後用H37Rv免疫的兔血清進行間接酶聯免疫吸附試驗（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）測定其免疫原性.結果PCR擴增的CFP10、ESAT6和Rv33425基因片段與基因文庫(Genbank)報道的完全一緻.三者在大腸桿菌BL21(DE3)中融閤錶達的產物約為22kDa,與預計大小相吻閤.Ni-NTA親和純化齣目的蛋白.ELISA顯示該蛋白具有較彊的免疫原性.結論結覈分枝桿菌CFP10-ESAT6-Rv3425融閤基因片段的融閤錶達純化後,可作為結覈病免疫診斷的一箇候選抗原.
목적 극륭표체결핵분지간균CFP10-ESAT6-Rv3425기인편단융합단백병순화,측항원적면역원성,위결핵병적림상진단제공유효적후선항원.방법이용생물신식학분석면역우세위점,설계불동인물,채용취합매련반응( Polymerase Chain Reaction,PCR)확증출상응기인편단,삽입pET30a표체재체,전입대장간균BL21( DE3),IPTG유도표체목적단백,친화순화후용H37Rv면역적토혈청진행간접매련면역흡부시험（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）측정기면역원성.결과PCR확증적CFP10、ESAT6화Rv33425기인편단여기인문고(Genbank)보도적완전일치.삼자재대장간균BL21(DE3)중융합표체적산물약위22kDa,여예계대소상문합.Ni-NTA친화순화출목적단백.ELISA현시해단백구유교강적면역원성.결론결핵분지간균CFP10-ESAT6-Rv3425융합기인편단적융합표체순화후,가작위결핵병면역진단적일개후선항원.
