南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2012年
6期
812-816
,共5页
裴静娴%王月刚%刘城%魏璇%李明琰%陈建威%吴平生
裴靜嫻%王月剛%劉城%魏璇%李明琰%陳建威%吳平生
배정한%왕월강%류성%위선%리명염%진건위%오평생
低氧诱导因子-1a%腺病毒载体%微血管内皮细胞%血管内皮生长因子
低氧誘導因子-1a%腺病毒載體%微血管內皮細胞%血管內皮生長因子
저양유도인자-1a%선병독재체%미혈관내피세포%혈관내피생장인자
目的 观察重组腺病毒三突变型低氧诱导因子-1cα(HIF-1α)对人微血管内皮细胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白表达的影响.方法 三突变型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒载体(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空载腺病毒载体(Ad-Null)分别在HEK293A细胞大量扩增,氯化铯梯度离心纯化,终点稀释法测定病毒滴度；双荧光素酶报告系统检测三突变型HIF-1α与野生型HIF-1α的转录活性；各重组腺病毒载体以最佳转染复数转染体外培养的hMVECs,Westem blotting测定HIF-1α和VEGF蛋白表达；MTS检测Ad-HIF-1α564/402/803对细胞增殖的影响.结果 三突变型HIF-1α转录活性显著高于野生型HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803组HIF-1α和VEGF蛋白表达量高于Ad-HIF-1αnature及其他组；VEGF蛋白表达水平与HIF-1α呈剂量依赖关系.Ad-HIF-1α564/402/803组第3、5天吸光度值均显著高于Ad-HIF-1αnature及其他组(P＜0.01).结论 三突变型HIF-1α在体外常氧条件下稳定高效表达,可诱导hMVECs VEGF蛋白表达上调,促进hMVECs增殖.
目的 觀察重組腺病毒三突變型低氧誘導因子-1cα(HIF-1α)對人微血管內皮細胞(hMVECs)增殖及VEGF蛋白錶達的影響.方法 三突變型HIF-1α腺病毒載體(Ad-HIF-1α564/402/803)、野生型HIF-1α腺病毒載體(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ及空載腺病毒載體(Ad-Null)分彆在HEK293A細胞大量擴增,氯化銫梯度離心純化,終點稀釋法測定病毒滴度；雙熒光素酶報告繫統檢測三突變型HIF-1α與野生型HIF-1α的轉錄活性；各重組腺病毒載體以最佳轉染複數轉染體外培養的hMVECs,Westem blotting測定HIF-1α和VEGF蛋白錶達；MTS檢測Ad-HIF-1α564/402/803對細胞增殖的影響.結果 三突變型HIF-1α轉錄活性顯著高于野生型HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803組HIF-1α和VEGF蛋白錶達量高于Ad-HIF-1αnature及其他組；VEGF蛋白錶達水平與HIF-1α呈劑量依賴關繫.Ad-HIF-1α564/402/803組第3、5天吸光度值均顯著高于Ad-HIF-1αnature及其他組(P＜0.01).結論 三突變型HIF-1α在體外常氧條件下穩定高效錶達,可誘導hMVECs VEGF蛋白錶達上調,促進hMVECs增殖.
목적 관찰중조선병독삼돌변형저양유도인자-1cα(HIF-1α)대인미혈관내피세포(hMVECs)증식급VEGF단백표체적영향.방법 삼돌변형HIF-1α선병독재체(Ad-HIF-1α564/402/803)、야생형HIF-1α선병독재체(Ad-HIF-1αnature)、Ad-LacZ급공재선병독재체(Ad-Null)분별재HEK293A세포대량확증,록화색제도리심순화,종점희석법측정병독적도；쌍형광소매보고계통검측삼돌변형HIF-1α여야생형HIF-1α적전록활성；각중조선병독재체이최가전염복수전염체외배양적hMVECs,Westem blotting측정HIF-1α화VEGF단백표체；MTS검측Ad-HIF-1α564/402/803대세포증식적영향.결과 삼돌변형HIF-1α전록활성현저고우야생형HIF-1α(P＜0.001):Ad-HIF-1α564/402/803조HIF-1α화VEGF단백표체량고우Ad-HIF-1αnature급기타조；VEGF단백표체수평여HIF-1α정제량의뢰관계.Ad-HIF-1α564/402/803조제3、5천흡광도치균현저고우Ad-HIF-1αnature급기타조(P＜0.01).결론 삼돌변형HIF-1α재체외상양조건하은정고효표체,가유도hMVECs VEGF단백표체상조,촉진hMVECs증식.
