中华实验外科杂志
中華實驗外科雜誌
중화실험외과잡지
CHINESE JOURNAL OF EXPERIMENTAL SURGERY
2006年
10期
1170-1171
,共2页
廖贵益%曾甫清%岳相辉%汪良%卢银平%朱朝辉
廖貴益%曾甫清%嶽相輝%汪良%盧銀平%硃朝輝
료귀익%증보청%악상휘%왕량%로은평%주조휘
线粒体促凋亡蛋白%尿路斑块蛋白%启动子%真核表达载体
線粒體促凋亡蛋白%尿路斑塊蛋白%啟動子%真覈錶達載體
선립체촉조망단백%뇨로반괴단백%계동자%진핵표체재체
目的 构建含线粒体促凋亡蛋白基因(Smac)、人尿路斑块蛋白I b(UpI b)启动子调控的真核表达载体,检测其在膀胱癌细胞的表达.方法 MluI+XbaI分别双酶切含Smac的真核表达质粒pcDNA3.1-Smac和UpIb启动子片段,T4DNA连接酶环化目的片段构建新质粒,酶切凝胶电泳和测序鉴定.新质粒转染12孔BIU-87细胞,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测6孔的Smac mRAN表达,免疫组织化学过氧化酶标记的链霉卵白素(SP)法检测另6孔的Smac蛋白表达.结果 pcDNA3.1-Smac中人巨细胞病毒启动子(CMV)和T7噬菌体启动子(T7)被成功替换为UpI b启动子,构建新质粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac;转染后BIU-87细胞Smac mRNA表达增强2.1倍、71%癌细胞中Smac蛋白表达增强(P＜0.05).结论 UpIb启动子调控含Smac的真核表达载体构建成功,且能在膀胱癌细胞中有效表达.
目的 構建含線粒體促凋亡蛋白基因(Smac)、人尿路斑塊蛋白I b(UpI b)啟動子調控的真覈錶達載體,檢測其在膀胱癌細胞的錶達.方法 MluI+XbaI分彆雙酶切含Smac的真覈錶達質粒pcDNA3.1-Smac和UpIb啟動子片段,T4DNA連接酶環化目的片段構建新質粒,酶切凝膠電泳和測序鑒定.新質粒轉染12孔BIU-87細胞,逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)檢測6孔的Smac mRAN錶達,免疫組織化學過氧化酶標記的鏈黴卵白素(SP)法檢測另6孔的Smac蛋白錶達.結果 pcDNA3.1-Smac中人巨細胞病毒啟動子(CMV)和T7噬菌體啟動子(T7)被成功替換為UpI b啟動子,構建新質粒pcDNA3-UpIb promoter-Smac;轉染後BIU-87細胞Smac mRNA錶達增彊2.1倍、71%癌細胞中Smac蛋白錶達增彊(P＜0.05).結論 UpIb啟動子調控含Smac的真覈錶達載體構建成功,且能在膀胱癌細胞中有效錶達.
목적 구건함선립체촉조망단백기인(Smac)、인뇨로반괴단백I b(UpI b)계동자조공적진핵표체재체,검측기재방광암세포적표체.방법 MluI+XbaI분별쌍매절함Smac적진핵표체질립pcDNA3.1-Smac화UpIb계동자편단,T4DNA련접매배화목적편단구건신질립,매절응효전영화측서감정.신질립전염12공BIU-87세포,역전록-취합매련반응(RT-PCR)검측6공적Smac mRAN표체,면역조직화학과양화매표기적련매란백소(SP)법검측령6공적Smac단백표체.결과 pcDNA3.1-Smac중인거세포병독계동자(CMV)화T7서균체계동자(T7)피성공체환위UpI b계동자,구건신질립pcDNA3-UpIb promoter-Smac;전염후BIU-87세포Smac mRNA표체증강2.1배、71%암세포중Smac단백표체증강(P＜0.05).결론 UpIb계동자조공함Smac적진핵표체재체구건성공,차능재방광암세포중유효표체.
