中华结核和呼吸杂志
中華結覈和呼吸雜誌
중화결핵화호흡잡지
Chinese Journal of Tuberculosis and Respiratory Diseases
2004年
3期
183-187
,共5页
陈效友%李传友%马玙%刘冲%王敬慧%张雪峰%昌增益
陳效友%李傳友%馬玙%劉遲%王敬慧%張雪峰%昌增益
진효우%리전우%마여%류충%왕경혜%장설봉%창증익
卡介苗%DNA结合蛋白质类%基因
卡介苗%DNA結閤蛋白質類%基因
잡개묘%DNA결합단백질류%기인
目的在卡介苗中建立基因敲除技术.方法通过分别设计两对引物,将靶基因[DNA结合蛋白1(MDP1)基因]通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增得到2个片段,分别插入pKO质粒中,构建得到基因敲除质粒pKO-MDP1,电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换,筛选出敲除菌株,并测其生长曲线.结果通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的、并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株,对敲除菌株与原代菌株每12 h测定其菌液的600 nm处吸光度(A600)值,连续16 d.两者的生长速度曲线呈现"S"形,两者之间的生长速度未见明显差别.结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体,MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一,但不是惟一的因素.
目的在卡介苗中建立基因敲除技術.方法通過分彆設計兩對引物,將靶基因[DNA結閤蛋白1(MDP1)基因]通過聚閤酶鏈反應(PCR)的方法擴增得到2箇片段,分彆插入pKO質粒中,構建得到基因敲除質粒pKO-MDP1,電轉入至卡介苗菌株細胞內併與BCG基因組中的MDP1基因同源交換,篩選齣敲除菌株,併測其生長麯線.結果通過2次PCR篩選和1次蔗糖反篩選後得到的、併在含潮黴素培養基上不能生長的菌株為MDP1基因敲除菌株,對敲除菌株與原代菌株每12 h測定其菌液的600 nm處吸光度(A600)值,連續16 d.兩者的生長速度麯線呈現"S"形,兩者之間的生長速度未見明顯差彆.結論 pKO質粒可作為基因敲除有用的質粒載體,MDP1基因可能是影響BCG生長的因素之一,但不是惟一的因素.
목적재잡개묘중건립기인고제기술.방법통과분별설계량대인물,장파기인[DNA결합단백1(MDP1)기인]통과취합매련반응(PCR)적방법확증득도2개편단,분별삽입pKO질립중,구건득도기인고제질립pKO-MDP1,전전입지잡개묘균주세포내병여BCG기인조중적MDP1기인동원교환,사선출고제균주,병측기생장곡선.결과통과2차PCR사선화1차자당반사선후득도적、병재함조매소배양기상불능생장적균주위MDP1기인고제균주,대고제균주여원대균주매12 h측정기균액적600 nm처흡광도(A600)치,련속16 d.량자적생장속도곡선정현"S"형,량자지간적생장속도미견명현차별.결론 pKO질립가작위기인고제유용적질립재체,MDP1기인가능시영향BCG생장적인소지일,단불시유일적인소.
