中国公共卫生
中國公共衛生
중국공공위생
CHINA PUBLIC HEALTH
2004年
6期
668-669
,共2页
伍忠銮%余新炳%吴德%徐劲%吴忠道%王海
伍忠鑾%餘新炳%吳德%徐勁%吳忠道%王海
오충란%여신병%오덕%서경%오충도%왕해
华支睾吸虫%谷胱甘肽转移酶%克隆%基因表达%纯化
華支睪吸蟲%穀胱甘肽轉移酶%剋隆%基因錶達%純化
화지고흡충%곡광감태전이매%극륭%기인표체%순화
目的扩增华支睾吸虫(Cs)一个编码谷胱甘肽转移酶(GST)的新基因,确认是否存在内含子,进行原核表达,纯化.方法用PCR方法从成虫cDNA文库和基因组中扩增CsGST基因,测序,定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠杆菌BL21/DE3表达,按照Ni-NTA agarose说明书纯化重组蛋白,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和薄层色谱(TLC)分析.结果 CsGST基因全长639 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-CsGST在大肠杆菌中得到了有效表达,融合蛋白的分子量约为30 kDa.重组蛋白达总蛋白的33%,纯化后的重组蛋白纯度为97%.结论 CsGST基因没有内含子,在大肠杆菌中能有效表达,重组蛋白得到了纯化,为进一步研究该基因的功能打下基础.
目的擴增華支睪吸蟲(Cs)一箇編碼穀胱甘肽轉移酶(GST)的新基因,確認是否存在內含子,進行原覈錶達,純化.方法用PCR方法從成蟲cDNA文庫和基因組中擴增CsGST基因,測序,定嚮剋隆到原覈錶達載體pET-30a(+),在大腸桿菌BL21/DE3錶達,按照Ni-NTA agarose說明書純化重組蛋白,用十二烷基硫痠鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和薄層色譜(TLC)分析.結果 CsGST基因全長639 bp,沒有內含子,構建的原覈錶達質粒pET-30a(+)-CsGST在大腸桿菌中得到瞭有效錶達,融閤蛋白的分子量約為30 kDa.重組蛋白達總蛋白的33%,純化後的重組蛋白純度為97%.結論 CsGST基因沒有內含子,在大腸桿菌中能有效錶達,重組蛋白得到瞭純化,為進一步研究該基因的功能打下基礎.
목적확증화지고흡충(Cs)일개편마곡광감태전이매(GST)적신기인,학인시부존재내함자,진행원핵표체,순화.방법용PCR방법종성충cDNA문고화기인조중확증CsGST기인,측서,정향극륭도원핵표체재체pET-30a(+),재대장간균BL21/DE3표체,안조Ni-NTA agarose설명서순화중조단백,용십이완기류산납-취병희선알응효전영(SDS-PAGE)화박층색보(TLC)분석.결과 CsGST기인전장639 bp,몰유내함자,구건적원핵표체질립pET-30a(+)-CsGST재대장간균중득도료유효표체,융합단백적분자량약위30 kDa.중조단백체총단백적33%,순화후적중조단백순도위97%.결론 CsGST기인몰유내함자,재대장간균중능유효표체,중조단백득도료순화,위진일보연구해기인적공능타하기출.
