微生物学报
微生物學報
미생물학보
ACTA MICROBIOLOGICA SINICA
2004年
6期
830-833
,共4页
郑海洲%杨虹%柏佳宁%赵宝华
鄭海洲%楊虹%柏佳寧%趙寶華
정해주%양홍%백가저%조보화
聚合酶链式反应%克隆%表达%穿梭表达载体
聚閤酶鏈式反應%剋隆%錶達%穿梭錶達載體
취합매련식반응%극륭%표체%천사표체재체
以ILTV基因组为模板,利用PCR特异扩增出gB基因,定向克隆到中间质粒载体pY-α,构建了中间质粒pY-α-gB.然后以中间质粒pY-α-gB为模板,扩增出含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的hsp-α-gB片段,回收补平后与穿梭表达载体pRR3平端连接,从而构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-gB.再将其电转化至耻垢分枝杆菌M.smegmatis mc2 155,ELISA检测表明重组菌株M.smegmatis mc2 155 (pR-α-gB)的表达产物具有很好的反应原性.Western blot检测说明gB基因在分枝杆菌中获得了表达并具有良好的免疫原性.鸡胚中和试验结果表明该重组菌株可以中和1个剂量EID50的ILTV强毒,能够保护SPF鸡胚抵抗强毒攻击.
以ILTV基因組為模闆,利用PCR特異擴增齣gB基因,定嚮剋隆到中間質粒載體pY-α,構建瞭中間質粒pY-α-gB.然後以中間質粒pY-α-gB為模闆,擴增齣含有人結覈分枝桿菌啟動子hsp70基因和堪薩斯分枝桿菌α信號肽基因的hsp-α-gB片段,迴收補平後與穿梭錶達載體pRR3平耑連接,從而構建大腸桿菌-分枝桿菌穿梭錶達質粒pR-α-gB.再將其電轉化至恥垢分枝桿菌M.smegmatis mc2 155,ELISA檢測錶明重組菌株M.smegmatis mc2 155 (pR-α-gB)的錶達產物具有很好的反應原性.Western blot檢測說明gB基因在分枝桿菌中穫得瞭錶達併具有良好的免疫原性.鷄胚中和試驗結果錶明該重組菌株可以中和1箇劑量EID50的ILTV彊毒,能夠保護SPF鷄胚牴抗彊毒攻擊.
이ILTV기인조위모판,이용PCR특이확증출gB기인,정향극륭도중간질립재체pY-α,구건료중간질립pY-α-gB.연후이중간질립pY-α-gB위모판,확증출함유인결핵분지간균계동자hsp70기인화감살사분지간균α신호태기인적hsp-α-gB편단,회수보평후여천사표체재체pRR3평단련접,종이구건대장간균-분지간균천사표체질립pR-α-gB.재장기전전화지치구분지간균M.smegmatis mc2 155,ELISA검측표명중조균주M.smegmatis mc2 155 (pR-α-gB)적표체산물구유흔호적반응원성.Western blot검측설명gB기인재분지간균중획득료표체병구유량호적면역원성.계배중화시험결과표명해중조균주가이중화1개제량EID50적ILTV강독,능구보호SPF계배저항강독공격.
