病毒学报
病毒學報
병독학보
CHINESE JOURNAL OF VIROLOGY
2006年
6期
462-465
,共4页
张守峰%李清竹%李忠%刘晔%张菲%卢彦欣%夏咸柱%扈荣良
張守峰%李清竹%李忠%劉曄%張菲%盧彥訢%夏鹹柱%扈榮良
장수봉%리청죽%리충%류엽%장비%로언흔%하함주%호영량
狂犬病病毒%RNAi%感染%糖蛋白%核蛋白
狂犬病病毒%RNAi%感染%糖蛋白%覈蛋白
광견병병독%RNAi%감염%당단백%핵단백
以质粒pSilencer2.1-U6 Hygro为基础,设计并构建了针对狂犬病病毒(RV)糖蛋白和核蛋白mRNA的共9个siRNA表达载体,转染BHK-21细胞系后,在潮霉素-B的筛选压力下,获得9个稳定转录相关siRNA的BHK-21细胞株.1000TCID50的RV分别感染24孔板内的上述9株细胞,48h后以直接免疫荧光法检测各株细胞上RV的增殖,结果显示,在经不同siRNA表达载体转染的BHK-21细胞中,RV增殖水平有不同程度下降,RV增殖水平最低者为对照细胞的1%,即RNA干扰效应最高可阻断99%RV的感染.针对其中阻断水平超过90%的靶序列G69和N19,人工合成其双链siRNA,瞬时转染BHK-21细胞后,仍可达到80%以上的感染阻断率.本试验为有效阻断RV早期感染提供了新选择,为通过RNAi研究RV的基因组功能提供了新的依据.
以質粒pSilencer2.1-U6 Hygro為基礎,設計併構建瞭針對狂犬病病毒(RV)糖蛋白和覈蛋白mRNA的共9箇siRNA錶達載體,轉染BHK-21細胞繫後,在潮黴素-B的篩選壓力下,穫得9箇穩定轉錄相關siRNA的BHK-21細胞株.1000TCID50的RV分彆感染24孔闆內的上述9株細胞,48h後以直接免疫熒光法檢測各株細胞上RV的增殖,結果顯示,在經不同siRNA錶達載體轉染的BHK-21細胞中,RV增殖水平有不同程度下降,RV增殖水平最低者為對照細胞的1%,即RNA榦擾效應最高可阻斷99%RV的感染.針對其中阻斷水平超過90%的靶序列G69和N19,人工閤成其雙鏈siRNA,瞬時轉染BHK-21細胞後,仍可達到80%以上的感染阻斷率.本試驗為有效阻斷RV早期感染提供瞭新選擇,為通過RNAi研究RV的基因組功能提供瞭新的依據.
이질립pSilencer2.1-U6 Hygro위기출,설계병구건료침대광견병병독(RV)당단백화핵단백mRNA적공9개siRNA표체재체,전염BHK-21세포계후,재조매소-B적사선압력하,획득9개은정전록상관siRNA적BHK-21세포주.1000TCID50적RV분별감염24공판내적상술9주세포,48h후이직접면역형광법검측각주세포상RV적증식,결과현시,재경불동siRNA표체재체전염적BHK-21세포중,RV증식수평유불동정도하강,RV증식수평최저자위대조세포적1%,즉RNA간우효응최고가조단99%RV적감염.침대기중조단수평초과90%적파서렬G69화N19,인공합성기쌍련siRNA,순시전염BHK-21세포후,잉가체도80%이상적감염조단솔.본시험위유효조단RV조기감염제공료신선택,위통과RNAi연구RV적기인조공능제공료신적의거.
