中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2006年
11期
2284-2286
,共3页
李方成%李军亮%梁伟强%刘然义%吴中华%张培峰%袁开长
李方成%李軍亮%樑偉彊%劉然義%吳中華%張培峰%袁開長
리방성%리군량%량위강%류연의%오중화%장배봉%원개장
葡萄糖转运体1%基因扩增%重组腺病毒载体
葡萄糖轉運體1%基因擴增%重組腺病毒載體
포도당전운체1%기인확증%중조선병독재체
目的:构建携带大鼠葡萄糖转运体1基因(GLUT1)的复制缺陷型重组腺病毒载体,为进一步研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡机制奠定基础.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法获取大鼠GLUT1基因全长cDNA,将其克隆至穿梭质粒pShuttle中构建穿梭质粒pShuttle-Glut1,经酶切后与线性化的腺病毒骨架质粒pAdeno-X体外连接并转化大肠杆菌DH5α,构建重组腺病毒质粒pAd-Glut1,酶切线性化重组腺病毒质粒后转染HEK293细胞包装成重组病毒颗粒,重组腺病毒在HEK293细胞中反复扩增数代后,分别用聚合酶链反应(PCR)及免疫印迹法(Western blotting)从基因和蛋白表达水平鉴定重组的腺病毒.结果:经PCR分析及DNA测序显示GLUT1 cDNA序列正确;筛选出重组腺病毒质粒pAd-Glut1后在HEK293细胞中成功包装出重组病毒,包装后冻融细胞行PCR及Western blotting检测表明重组腺病毒包装成功.结论:成功扩增了大鼠GLUT1基因并构建了携带大鼠GLUT1基因的复制缺陷型重组腺病毒载体,这有助于研究脑缺血缺氧引起的神经元死亡的机制.
目的:構建攜帶大鼠葡萄糖轉運體1基因(GLUT1)的複製缺陷型重組腺病毒載體,為進一步研究腦缺血缺氧引起的神經元死亡機製奠定基礎.方法:採用逆轉錄-聚閤酶鏈反應(RT-PCR)的方法穫取大鼠GLUT1基因全長cDNA,將其剋隆至穿梭質粒pShuttle中構建穿梭質粒pShuttle-Glut1,經酶切後與線性化的腺病毒骨架質粒pAdeno-X體外連接併轉化大腸桿菌DH5α,構建重組腺病毒質粒pAd-Glut1,酶切線性化重組腺病毒質粒後轉染HEK293細胞包裝成重組病毒顆粒,重組腺病毒在HEK293細胞中反複擴增數代後,分彆用聚閤酶鏈反應(PCR)及免疫印跡法(Western blotting)從基因和蛋白錶達水平鑒定重組的腺病毒.結果:經PCR分析及DNA測序顯示GLUT1 cDNA序列正確;篩選齣重組腺病毒質粒pAd-Glut1後在HEK293細胞中成功包裝齣重組病毒,包裝後凍融細胞行PCR及Western blotting檢測錶明重組腺病毒包裝成功.結論:成功擴增瞭大鼠GLUT1基因併構建瞭攜帶大鼠GLUT1基因的複製缺陷型重組腺病毒載體,這有助于研究腦缺血缺氧引起的神經元死亡的機製.
목적:구건휴대대서포도당전운체1기인(GLUT1)적복제결함형중조선병독재체,위진일보연구뇌결혈결양인기적신경원사망궤제전정기출.방법:채용역전록-취합매련반응(RT-PCR)적방법획취대서GLUT1기인전장cDNA,장기극륭지천사질립pShuttle중구건천사질립pShuttle-Glut1,경매절후여선성화적선병독골가질립pAdeno-X체외련접병전화대장간균DH5α,구건중조선병독질립pAd-Glut1,매절선성화중조선병독질립후전염HEK293세포포장성중조병독과립,중조선병독재HEK293세포중반복확증수대후,분별용취합매련반응(PCR)급면역인적법(Western blotting)종기인화단백표체수평감정중조적선병독.결과:경PCR분석급DNA측서현시GLUT1 cDNA서렬정학;사선출중조선병독질립pAd-Glut1후재HEK293세포중성공포장출중조병독,포장후동융세포행PCR급Western blotting검측표명중조선병독포장성공.결론:성공확증료대서GLUT1기인병구건료휴대대서GLUT1기인적복제결함형중조선병독재체,저유조우연구뇌결혈결양인기적신경원사망적궤제.
