泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2007年
4期
259-262
,共4页
王丽%何涛%郑小莉%宋杰%谢华福%梅志强%李娟
王麗%何濤%鄭小莉%宋傑%謝華福%梅誌彊%李娟
왕려%하도%정소리%송걸%사화복%매지강%리연
猪INF-γ基因%密码子偏好性%基因合成%重叠PCR%原核表达
豬INF-γ基因%密碼子偏好性%基因閤成%重疊PCR%原覈錶達
저INF-γ기인%밀마자편호성%기인합성%중첩PCR%원핵표체
目的:构建猪干扰素-γ基因(PoIFN-γ)的融合表达质粒,并在原核系统表达,为猪γ干扰素生物药剂或疫苗佐剂的开发奠定基础.方法:选择大肠杆菌偏爱密码子,分成20个长约48 bp且相互配对的寡核苷酸片段,采用重叠PCR方法人工合成了猪干扰素-γ成熟蛋白编码基因,并经测序证实后克隆至原核表达载体pQE30中.经限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析后,不同温度下以IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析.结果:限制性核酸内切酶酶切鉴定、PCR和核酸序列分析表明,扩增出了PoIFN-γ基因,成功构建了重组质粒pQE30/PoIFN-γ,SDS-PAGE分析显示目的蛋白以包涵体的形式在大肠杆菌中获得高表达,表达量占总菌体蛋白的84.5%.结论:应用重叠PCR合成PoIFN-γ基因并在大肠杆菌中得到了高效表达.
目的:構建豬榦擾素-γ基因(PoIFN-γ)的融閤錶達質粒,併在原覈繫統錶達,為豬γ榦擾素生物藥劑或疫苗佐劑的開髮奠定基礎.方法:選擇大腸桿菌偏愛密碼子,分成20箇長約48 bp且相互配對的寡覈苷痠片段,採用重疊PCR方法人工閤成瞭豬榦擾素-γ成熟蛋白編碼基因,併經測序證實後剋隆至原覈錶達載體pQE30中.經限製性覈痠內切酶酶切鑒定、PCR和覈痠序列分析後,不同溫度下以IPTG誘導錶達,對錶達產物進行SDS-PAGE電泳分析.結果:限製性覈痠內切酶酶切鑒定、PCR和覈痠序列分析錶明,擴增齣瞭PoIFN-γ基因,成功構建瞭重組質粒pQE30/PoIFN-γ,SDS-PAGE分析顯示目的蛋白以包涵體的形式在大腸桿菌中穫得高錶達,錶達量佔總菌體蛋白的84.5%.結論:應用重疊PCR閤成PoIFN-γ基因併在大腸桿菌中得到瞭高效錶達.
목적:구건저간우소-γ기인(PoIFN-γ)적융합표체질립,병재원핵계통표체,위저γ간우소생물약제혹역묘좌제적개발전정기출.방법:선택대장간균편애밀마자,분성20개장약48 bp차상호배대적과핵감산편단,채용중첩PCR방법인공합성료저간우소-γ성숙단백편마기인,병경측서증실후극륭지원핵표체재체pQE30중.경한제성핵산내절매매절감정、PCR화핵산서렬분석후,불동온도하이IPTG유도표체,대표체산물진행SDS-PAGE전영분석.결과:한제성핵산내절매매절감정、PCR화핵산서렬분석표명,확증출료PoIFN-γ기인,성공구건료중조질립pQE30/PoIFN-γ,SDS-PAGE분석현시목적단백이포함체적형식재대장간균중획득고표체,표체량점총균체단백적84.5%.결론:응용중첩PCR합성PoIFN-γ기인병재대장간균중득도료고효표체.
