中国药科大学学报
中國藥科大學學報
중국약과대학학보
JOURNAL OF CHINA PHARMACEUTICAL UNIVERSITY
2008年
5期
457-462
,共6页
张红刚%徐建敏%费晓庆%鞠煌先%刘胜利
張紅剛%徐建敏%費曉慶%鞠煌先%劉勝利
장홍강%서건민%비효경%국황선%류성리
RNA干扰%核苷载体%吉西他滨%毛细管区带电泳%胰腺癌细胞株
RNA榦擾%覈苷載體%吉西他濱%毛細管區帶電泳%胰腺癌細胞株
RNA간우%핵감재체%길서타빈%모세관구대전영%이선암세포주
目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响.方法:将能特异性下调hENT1的pSilertce-hENT1 4.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内.采用G418筛选阳性克隆细胞.RT-PCR检测hENT1 mRNA表达情况.培养Sw1990细胞、pSilence-hENTISi-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞.3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100 ttg/mL,温育0,15,30 min,1,2,4 h后收集细胞.取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量.根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度.结果:pSilence-hENTlSi-Sw1990细胞的hENT1 mRNA表达水平下调50%.Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30 min达(55.1±10.4)μg/mL,60 min达(70.2±7.8)p,g/mL,120 min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL.相比之下,pSilence-hENTlSi-Sw1990组细胞内质量药物浓度30 min达(41.3±4.9)μg/mL,60 min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P＜0.05).pSilence-hENTlcontrol-Sw1990组与Sw1990组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论:下调hENTI可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENTl是吉西他滨跨膜转运的重要通道.
目的:明確下調hENT1後對胰腺癌細胞株Sw1990跨膜轉運吉西他濱的影響.方法:將能特異性下調hENT1的pSilertce-hENT1 4.1-CMV neo的重組質粒以及對照質粒轉染至胰腺癌Sw1990細胞內.採用G418篩選暘性剋隆細胞.RT-PCR檢測hENT1 mRNA錶達情況.培養Sw1990細胞、pSilence-hENTISi-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990細胞.3組細胞培養基中吉西他濱質量濃度均為100 ttg/mL,溫育0,15,30 min,1,2,4 h後收集細胞.取等量細胞懸液兩份各100μL,一份作為檢測樣本用毛細管區帶電泳測定吉西他濱總量,另一份用作平行樣本測定總蛋白含量.根據蛋白-細胞數量標準麯線來確定平行樣本中細胞數,再用血細胞分析儀確定細胞體積,最後,計算單細胞內藥物總量及濃度.結果:pSilence-hENTlSi-Sw1990細胞的hENT1 mRNA錶達水平下調50%.Sw1990組用含吉西他濱(100μg/mL)的DMEM培養基溫育後,細胞內藥物質量濃度在30 min達(55.1±10.4)μg/mL,60 min達(70.2±7.8)p,g/mL,120 min後處于平檯期(90.1±6.0)μg/mL.相比之下,pSilence-hENTlSi-Sw1990組細胞內質量藥物濃度30 min達(41.3±4.9)μg/mL,60 min達平檯期(51.3±11.8)μg/mL,與對照組相比,細胞內濃度處于較低水平(P＜0.05).pSilence-hENTlcontrol-Sw1990組與Sw1990組相比差異無統計學意義(P＞0.05).結論:下調hENTI可以抑製胰腺癌細胞株Sw1990對吉西他濱的攝取,hENTl是吉西他濱跨膜轉運的重要通道.
목적:명학하조hENT1후대이선암세포주Sw1990과막전운길서타빈적영향.방법:장능특이성하조hENT1적pSilertce-hENT1 4.1-CMV neo적중조질립이급대조질립전염지이선암Sw1990세포내.채용G418사선양성극륭세포.RT-PCR검측hENT1 mRNA표체정황.배양Sw1990세포、pSilence-hENTISi-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990세포.3조세포배양기중길서타빈질량농도균위100 ttg/mL,온육0,15,30 min,1,2,4 h후수집세포.취등량세포현액량빈각100μL,일빈작위검측양본용모세관구대전영측정길서타빈총량,령일빈용작평행양본측정총단백함량.근거단백-세포수량표준곡선래학정평행양본중세포수,재용혈세포분석의학정세포체적,최후,계산단세포내약물총량급농도.결과:pSilence-hENTlSi-Sw1990세포적hENT1 mRNA표체수평하조50%.Sw1990조용함길서타빈(100μg/mL)적DMEM배양기온육후,세포내약물질량농도재30 min체(55.1±10.4)μg/mL,60 min체(70.2±7.8)p,g/mL,120 min후처우평태기(90.1±6.0)μg/mL.상비지하,pSilence-hENTlSi-Sw1990조세포내질량약물농도30 min체(41.3±4.9)μg/mL,60 min체평태기(51.3±11.8)μg/mL,여대조조상비,세포내농도처우교저수평(P＜0.05).pSilence-hENTlcontrol-Sw1990조여Sw1990조상비차이무통계학의의(P＞0.05).결론:하조hENTI가이억제이선암세포주Sw1990대길서타빈적섭취,hENTl시길서타빈과막전운적중요통도.
