华中科技大学学报（医学版）
華中科技大學學報（醫學版）
화중과기대학학보（의학판）
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINAE TONGJI
2009年
1期
1-5
,共5页
郝娟%段红霞%李庆%孙伟%钟茂华%翁秀芳%吴雄文
郝娟%段紅霞%李慶%孫偉%鐘茂華%翁秀芳%吳雄文
학연%단홍하%리경%손위%종무화%옹수방%오웅문
β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白%真核表达%亲合层析%构象完整
β2m-HLA-A2/IgG1融閤蛋白%真覈錶達%親閤層析%構象完整
β2m-HLA-A2/IgG1융합단백%진핵표체%친합층석%구상완정
目的 HLA-A2/IgG1二聚体经蛋白A(SPA)亲合层析柱浓缩纯化时容易发生β2m解离,为了解决这个问题,研究构建与表达β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白.方法 利用基因重组技术构建β2m-HLA-A2/IgG1融合基因真核表达载体pcDNA3-1(+)-[β2m-HLA-A2/IgG1],将其转染721.221细胞系,筛选高表达β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的细胞株;收集细胞培养上清,SPA亲合层析柱浓缩纯化,检测该蛋白的纯化效率.结果 β2m-HLA-A2/IgG1融合基因转染721.22I细胞后可表达正确构象的β2m-HLA-A2/IgG1二聚体,Western blot显示β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白的分子量与预期大小一致;经SPA亲合层析柱纯化后,β2m-HLA-A2/IgG1融合蛋白较HLA-A2/IgG1融合蛋白的纯化效率约高5倍.结论 共价连接β2m的HLA-A2二聚体有助于HLA-A2二聚体在低pH值的环境下保持构象完整.
目的 HLA-A2/IgG1二聚體經蛋白A(SPA)親閤層析柱濃縮純化時容易髮生β2m解離,為瞭解決這箇問題,研究構建與錶達β2m-HLA-A2/IgG1融閤蛋白.方法 利用基因重組技術構建β2m-HLA-A2/IgG1融閤基因真覈錶達載體pcDNA3-1(+)-[β2m-HLA-A2/IgG1],將其轉染721.221細胞繫,篩選高錶達β2m-HLA-A2/IgG1融閤蛋白的細胞株;收集細胞培養上清,SPA親閤層析柱濃縮純化,檢測該蛋白的純化效率.結果 β2m-HLA-A2/IgG1融閤基因轉染721.22I細胞後可錶達正確構象的β2m-HLA-A2/IgG1二聚體,Western blot顯示β2m-HLA-A2/IgG1融閤蛋白的分子量與預期大小一緻;經SPA親閤層析柱純化後,β2m-HLA-A2/IgG1融閤蛋白較HLA-A2/IgG1融閤蛋白的純化效率約高5倍.結論 共價連接β2m的HLA-A2二聚體有助于HLA-A2二聚體在低pH值的環境下保持構象完整.
목적 HLA-A2/IgG1이취체경단백A(SPA)친합층석주농축순화시용역발생β2m해리,위료해결저개문제,연구구건여표체β2m-HLA-A2/IgG1융합단백.방법 이용기인중조기술구건β2m-HLA-A2/IgG1융합기인진핵표체재체pcDNA3-1(+)-[β2m-HLA-A2/IgG1],장기전염721.221세포계,사선고표체β2m-HLA-A2/IgG1융합단백적세포주;수집세포배양상청,SPA친합층석주농축순화,검측해단백적순화효솔.결과 β2m-HLA-A2/IgG1융합기인전염721.22I세포후가표체정학구상적β2m-HLA-A2/IgG1이취체,Western blot현시β2m-HLA-A2/IgG1융합단백적분자량여예기대소일치;경SPA친합층석주순화후,β2m-HLA-A2/IgG1융합단백교HLA-A2/IgG1융합단백적순화효솔약고5배.결론 공개련접β2m적HLA-A2이취체유조우HLA-A2이취체재저pH치적배경하보지구상완정.
