遗传
遺傳
유전
HEREDITAS(BEIJING)
2009年
5期
552-560
,共9页
王勤熙%李凯%周宇荀%肖君华
王勤熙%李凱%週宇荀%肖君華
왕근희%리개%주우순%초군화
通用引物%多重定量RT-PCR%基因表达谱分析%性发育启动
通用引物%多重定量RT-PCR%基因錶達譜分析%性髮育啟動
통용인물%다중정량RT-PCR%기인표체보분석%성발육계동
文章建立并优化了一种基于荧光通用引物的多重定量RT-PCR技术,该技术采用了嵌合特异引物引导荧光通用引物的扩增方案,多个目的基因被一对通用引物等比例扩增,从而实现多重定量检测.该技术实现了经济可靠的中通量基因表达定量研究,弥补了基因表达分析平台中cDNA芯片定量准确性低和Real-time quanti-tative PCR通量小的缺点,完善了整个基因表达的分析过程.文章以小鼠X染色体上影响性发育启动的QTL区段为例,选择11个目的基因进行了技术构建及优化,确定了该技术的检测灵敏度为102拷贝,通用引物与上游嵌合特异引物的比例以1:1为佳,并且验证了该技术的重复性和准确性.降落(Touchdown)PCR结合通用引物补加实验表明,该优化步骤可大大改善低丰度表达基因的扩增.通过对2个品系(C3H/HeJ和C57BL/6J)15日龄小鼠的下丘脑和睾丸组织中的11个基因的表达分析,在下丘脑中找到了一个差异表达的基因PHF6可用于进一步的基因功能研究.
文章建立併優化瞭一種基于熒光通用引物的多重定量RT-PCR技術,該技術採用瞭嵌閤特異引物引導熒光通用引物的擴增方案,多箇目的基因被一對通用引物等比例擴增,從而實現多重定量檢測.該技術實現瞭經濟可靠的中通量基因錶達定量研究,瀰補瞭基因錶達分析平檯中cDNA芯片定量準確性低和Real-time quanti-tative PCR通量小的缺點,完善瞭整箇基因錶達的分析過程.文章以小鼠X染色體上影響性髮育啟動的QTL區段為例,選擇11箇目的基因進行瞭技術構建及優化,確定瞭該技術的檢測靈敏度為102拷貝,通用引物與上遊嵌閤特異引物的比例以1:1為佳,併且驗證瞭該技術的重複性和準確性.降落(Touchdown)PCR結閤通用引物補加實驗錶明,該優化步驟可大大改善低豐度錶達基因的擴增.通過對2箇品繫(C3H/HeJ和C57BL/6J)15日齡小鼠的下丘腦和睪汍組織中的11箇基因的錶達分析,在下丘腦中找到瞭一箇差異錶達的基因PHF6可用于進一步的基因功能研究.
문장건립병우화료일충기우형광통용인물적다중정량RT-PCR기술,해기술채용료감합특이인물인도형광통용인물적확증방안,다개목적기인피일대통용인물등비례확증,종이실현다중정량검측.해기술실현료경제가고적중통량기인표체정량연구,미보료기인표체분석평태중cDNA심편정량준학성저화Real-time quanti-tative PCR통량소적결점,완선료정개기인표체적분석과정.문장이소서X염색체상영향성발육계동적QTL구단위례,선택11개목적기인진행료기술구건급우화,학정료해기술적검측령민도위102고패,통용인물여상유감합특이인물적비례이1:1위가,병차험증료해기술적중복성화준학성.강락(Touchdown)PCR결합통용인물보가실험표명,해우화보취가대대개선저봉도표체기인적확증.통과대2개품계(C3H/HeJ화C57BL/6J)15일령소서적하구뇌화고환조직중적11개기인적표체분석,재하구뇌중조도료일개차이표체적기인PHF6가용우진일보적기인공능연구.
