泸州医学院学报
瀘州醫學院學報
로주의학원학보
JOURNAL OF LUZHOU MEDICAL COLLEGE
2011年
2期
111-115
,共5页
邱妍妍%毛亮%谭晓秋%曾晓荣%杨艳
邱妍妍%毛亮%譚曉鞦%曾曉榮%楊豔
구연연%모량%담효추%증효영%양염
sGCα基因%sGCβ基因%人肠系膜动脉平滑肌%实时荧光定量PCR
sGCα基因%sGCβ基因%人腸繫膜動脈平滑肌%實時熒光定量PCR
sGCα기인%sGCβ기인%인장계막동맥평활기%실시형광정량PCR
目的:建立实时荧光定量PCR检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达水平的检测方法,并构建相应质粒标准品,为进一步研究基因功能奠定基础.方法:提取人肠系膜动脉组织总RNA,采用RT-PCR方法获取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,与pNID-18T vector连接,并转化到大肠杆菌DH5α细胞,通过PCR和测序鉴定重组质粒.提取含目的基因的质粒作为标准品,采用SYBR Green Ⅰ法检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达和构建标准曲线.结果:人肠系膜动脉平滑肌存在sGCα和sGCβ基因表达,质粒标准品经过PCR鉴定并测序,与数据库公布的序列完全一致,标准曲线线性关系好,相关系数R2>0.99.结论:建立了稳定的定量检测方法,并成功用于检测人肠系膜动脉平滑肌sGCα和sGCβ基因表达,构建质粒标准品能用于后续实验.
目的:建立實時熒光定量PCR檢測人腸繫膜動脈平滑肌sGCα和sGCβ基因錶達水平的檢測方法,併構建相應質粒標準品,為進一步研究基因功能奠定基礎.方法:提取人腸繫膜動脈組織總RNA,採用RT-PCR方法穫取sGCα、sGCβ、GAPDH基因片段,與pNID-18T vector連接,併轉化到大腸桿菌DH5α細胞,通過PCR和測序鑒定重組質粒.提取含目的基因的質粒作為標準品,採用SYBR Green Ⅰ法檢測人腸繫膜動脈平滑肌sGCα和sGCβ基因錶達和構建標準麯線.結果:人腸繫膜動脈平滑肌存在sGCα和sGCβ基因錶達,質粒標準品經過PCR鑒定併測序,與數據庫公佈的序列完全一緻,標準麯線線性關繫好,相關繫數R2>0.99.結論:建立瞭穩定的定量檢測方法,併成功用于檢測人腸繫膜動脈平滑肌sGCα和sGCβ基因錶達,構建質粒標準品能用于後續實驗.
목적:건립실시형광정량PCR검측인장계막동맥평활기sGCα화sGCβ기인표체수평적검측방법,병구건상응질립표준품,위진일보연구기인공능전정기출.방법:제취인장계막동맥조직총RNA,채용RT-PCR방법획취sGCα、sGCβ、GAPDH기인편단,여pNID-18T vector련접,병전화도대장간균DH5α세포,통과PCR화측서감정중조질립.제취함목적기인적질립작위표준품,채용SYBR Green Ⅰ법검측인장계막동맥평활기sGCα화sGCβ기인표체화구건표준곡선.결과:인장계막동맥평활기존재sGCα화sGCβ기인표체,질립표준품경과PCR감정병측서,여수거고공포적서렬완전일치,표준곡선선성관계호,상관계수R2>0.99.결론:건립료은정적정량검측방법,병성공용우검측인장계막동맥평활기sGCα화sGCβ기인표체,구건질립표준품능용우후속실험.
