生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
11期
154-159
,共6页
金辉%廖思明%王青艳%刘筱梦%黄日波
金輝%廖思明%王青豔%劉篠夢%黃日波
금휘%료사명%왕청염%류소몽%황일파
碱性α-淀粉酶%巨大芽孢杆菌%芽孢杆菌表达系统%基因表达%酶学性质
堿性α-澱粉酶%巨大芽孢桿菌%芽孢桿菌錶達繫統%基因錶達%酶學性質
감성α-정분매%거대아포간균%아포간균표체계통%기인표체%매학성질
将已克隆的碱性α-淀粉酶基因信号肽编码序列去除,用PCR的方法加入酶切位点,然后与表达载体pHIS1525连接转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-JH,并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌YYBm1原生质体,获得基因工程菌YYBm1 -pHIS1525-JH.SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达.酶学性质研究表明,该酶的最适温度与pH值分别为60℃与pH8.5,在pH7.0 - 10.5之间具有较好的稳定性,Km值为1.94 mg/mL,酶活力可达2516.5 U.
將已剋隆的堿性α-澱粉酶基因信號肽編碼序列去除,用PCR的方法加入酶切位點,然後與錶達載體pHIS1525連接轉化大腸桿菌DH5α,篩選齣暘性轉化子DH5α-pHIS1525-JH,併提取質粒進一步轉化巨大芽孢桿菌YYBm1原生質體,穫得基因工程菌YYBm1 -pHIS1525-JH.SDS-PAGE分析錶明該基因在巨大芽孢桿菌中得到瞭有效錶達.酶學性質研究錶明,該酶的最適溫度與pH值分彆為60℃與pH8.5,在pH7.0 - 10.5之間具有較好的穩定性,Km值為1.94 mg/mL,酶活力可達2516.5 U.
장이극륭적감성α-정분매기인신호태편마서렬거제,용PCR적방법가입매절위점,연후여표체재체pHIS1525련접전화대장간균DH5α,사선출양성전화자DH5α-pHIS1525-JH,병제취질립진일보전화거대아포간균YYBm1원생질체,획득기인공정균YYBm1 -pHIS1525-JH.SDS-PAGE분석표명해기인재거대아포간균중득도료유효표체.매학성질연구표명,해매적최괄온도여pH치분별위60℃여pH8.5,재pH7.0 - 10.5지간구유교호적은정성,Km치위1.94 mg/mL,매활력가체2516.5 U.
