中国医科大学学报
中國醫科大學學報
중국의과대학학보
JOURNAL OF CHINA MEDICAL UNIVERSITY
2011年
7期
626-630
,共5页
代政伟%张华%孟涛%晏宁%李洁颖%晏勇
代政偉%張華%孟濤%晏寧%李潔穎%晏勇
대정위%장화%맹도%안저%리길영%안용
外源性硫化氢%β位淀粉样前体蛋白裂解酶1%磷脂酰肌醇3-激酶%丝氨酸苏氨酸蛋白激酶%细胞外信号调节激酶1/2
外源性硫化氫%β位澱粉樣前體蛋白裂解酶1%燐脂酰肌醇3-激酶%絲氨痠囌氨痠蛋白激酶%細胞外信號調節激酶1/2
외원성류화경%β위정분양전체단백렬해매1%린지선기순3-격매%사안산소안산단백격매%세포외신호조절격매1/2
目的 观察外源性硫化氢(H2S)对嗜铬细胞瘤细胞(PC12)β位淀粉样前体蛋白裂解酶1( BACE1)表达的影响,并探讨可能涉及的细胞信号机制.方法用不同浓度的硫氢化钠(NaHS)处理体外培养的PC12细胞,利用RT-PCR和Western blot法检测细胞内BACE1 mRNA及蛋白表达；继以LY294002和PD98059分别阻断磷脂酰肌醇3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3-K/Akt)及丝裂酶原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶1/2( MAPK/ERK1/2)通路,Western blot法检测其对NaHS诱导的通路下游蛋白Akt1和ERK1/2磷酸化的影响及其对BACE1蛋白表达变化的调节；ELISA法检测细胞培养液中Aβ42水平的变化.结果NaHS在实验浓度范围内呈剂量依赖性下调BACE1mRNA及蛋白表达,200μmo/L时最明显,各NaHS组与对照组相比,差异均有统计学意义(P＜ 0.05);LY294002抑制NaHS诱导的Akt1蛋白磷酸化,削弱NaHS对BACE1蛋白的下调作用,其表达在LY294002预处理组与NaHS 200μmol/L组相比,差异具有统计学意义(P＜0.05)；而PD98059虽能抑制NaHS导致的ERK1/2蛋白磷酸化,但对其调节BACE1蛋白表达无影响,PD98059预处理与NaHS 200μmol/L组相比,差异无统计学意义(P＞0.05);不同处理条件下的Aβ42表达与BACE1变化趋势基本一致.结论外源性H2S下调PC12细胞BACE1表达,其机制可能与PI3-K/Akt信号通路的激活有关,而与MAPK/ERK1/2通路无关.
目的 觀察外源性硫化氫(H2S)對嗜鉻細胞瘤細胞(PC12)β位澱粉樣前體蛋白裂解酶1( BACE1)錶達的影響,併探討可能涉及的細胞信號機製.方法用不同濃度的硫氫化鈉(NaHS)處理體外培養的PC12細胞,利用RT-PCR和Western blot法檢測細胞內BACE1 mRNA及蛋白錶達；繼以LY294002和PD98059分彆阻斷燐脂酰肌醇3-激酶/絲氨痠囌氨痠蛋白激酶(PI3-K/Akt)及絲裂酶原活化蛋白激酶/細胞外信號調節激酶1/2( MAPK/ERK1/2)通路,Western blot法檢測其對NaHS誘導的通路下遊蛋白Akt1和ERK1/2燐痠化的影響及其對BACE1蛋白錶達變化的調節；ELISA法檢測細胞培養液中Aβ42水平的變化.結果NaHS在實驗濃度範圍內呈劑量依賴性下調BACE1mRNA及蛋白錶達,200μmo/L時最明顯,各NaHS組與對照組相比,差異均有統計學意義(P＜ 0.05);LY294002抑製NaHS誘導的Akt1蛋白燐痠化,削弱NaHS對BACE1蛋白的下調作用,其錶達在LY294002預處理組與NaHS 200μmol/L組相比,差異具有統計學意義(P＜0.05)；而PD98059雖能抑製NaHS導緻的ERK1/2蛋白燐痠化,但對其調節BACE1蛋白錶達無影響,PD98059預處理與NaHS 200μmol/L組相比,差異無統計學意義(P＞0.05);不同處理條件下的Aβ42錶達與BACE1變化趨勢基本一緻.結論外源性H2S下調PC12細胞BACE1錶達,其機製可能與PI3-K/Akt信號通路的激活有關,而與MAPK/ERK1/2通路無關.
목적 관찰외원성류화경(H2S)대기락세포류세포(PC12)β위정분양전체단백렬해매1( BACE1)표체적영향,병탐토가능섭급적세포신호궤제.방법용불동농도적류경화납(NaHS)처리체외배양적PC12세포,이용RT-PCR화Western blot법검측세포내BACE1 mRNA급단백표체；계이LY294002화PD98059분별조단린지선기순3-격매/사안산소안산단백격매(PI3-K/Akt)급사렬매원활화단백격매/세포외신호조절격매1/2( MAPK/ERK1/2)통로,Western blot법검측기대NaHS유도적통로하유단백Akt1화ERK1/2린산화적영향급기대BACE1단백표체변화적조절；ELISA법검측세포배양액중Aβ42수평적변화.결과NaHS재실험농도범위내정제량의뢰성하조BACE1mRNA급단백표체,200μmo/L시최명현,각NaHS조여대조조상비,차이균유통계학의의(P＜ 0.05);LY294002억제NaHS유도적Akt1단백린산화,삭약NaHS대BACE1단백적하조작용,기표체재LY294002예처리조여NaHS 200μmol/L조상비,차이구유통계학의의(P＜0.05)；이PD98059수능억제NaHS도치적ERK1/2단백린산화,단대기조절BACE1단백표체무영향,PD98059예처리여NaHS 200μmol/L조상비,차이무통계학의의(P＞0.05);불동처리조건하적Aβ42표체여BACE1변화추세기본일치.결론외원성H2S하조PC12세포BACE1표체,기궤제가능여PI3-K/Akt신호통로적격활유관,이여MAPK/ERK1/2통로무관.
