动物医学进展
動物醫學進展
동물의학진전
PROGRESS IN VETERINARY MEDICINE
2012年
1期
19-22
,共4页
李建辉%左玉柱%孙彦欣%范京惠
李建輝%左玉柱%孫彥訢%範京惠
리건휘%좌옥주%손언흔%범경혜
猪繁殖与呼吸综合征病毒%GP5基因%原核表达
豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒%GP5基因%原覈錶達
저번식여호흡종합정병독%GP5기인%원핵표체
本研究从河北省保定地区6份疑似感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)病猪的肺脏中,通过RT-PCR获得PRRSV GP5蛋白完整的基因片段,克隆至pMD18-T载体.经测序鉴定正确后,再设计一对引物从重组载体pMD18-T-GP5中扩增出缺失了N端30个氨基酸残基的dGP5的编码序列dORF5,克隆至原核表达载体pGEX-6p-1,构建原核重组质粒(pGEX-6p-dGP5),转化至E.coli BL21感受态细胞.经IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳可检测到分子质量为40 ku的目的蛋白.经Western blot分析表明,该蛋白与PRRS阳性血清具有良好的免疫反应性,为进一步研究PRRS新型基因工程疫苗和诊断试剂奠定了基础.
本研究從河北省保定地區6份疑似感染豬繁殖與呼吸綜閤徵病毒(PRRSV)病豬的肺髒中,通過RT-PCR穫得PRRSV GP5蛋白完整的基因片段,剋隆至pMD18-T載體.經測序鑒定正確後,再設計一對引物從重組載體pMD18-T-GP5中擴增齣缺失瞭N耑30箇氨基痠殘基的dGP5的編碼序列dORF5,剋隆至原覈錶達載體pGEX-6p-1,構建原覈重組質粒(pGEX-6p-dGP5),轉化至E.coli BL21感受態細胞.經IPTG誘導後,SDS-PAGE電泳可檢測到分子質量為40 ku的目的蛋白.經Western blot分析錶明,該蛋白與PRRS暘性血清具有良好的免疫反應性,為進一步研究PRRS新型基因工程疫苗和診斷試劑奠定瞭基礎.
본연구종하북성보정지구6빈의사감염저번식여호흡종합정병독(PRRSV)병저적폐장중,통과RT-PCR획득PRRSV GP5단백완정적기인편단,극륭지pMD18-T재체.경측서감정정학후,재설계일대인물종중조재체pMD18-T-GP5중확증출결실료N단30개안기산잔기적dGP5적편마서렬dORF5,극륭지원핵표체재체pGEX-6p-1,구건원핵중조질립(pGEX-6p-dGP5),전화지E.coli BL21감수태세포.경IPTG유도후,SDS-PAGE전영가검측도분자질량위40 ku적목적단백.경Western blot분석표명,해단백여PRRS양성혈청구유량호적면역반응성,위진일보연구PRRS신형기인공정역묘화진단시제전정료기출.
