CAJ | 학술논문

肠出血性大肠杆菌O157:H7是一种重要的人畜共患传染病病原菌.为建立一种特异、灵敏的O157:H7新型检测技术,以O157抗原基因(rfbE基因)为模板设计特异性引物,利用叠氮溴化乙锭(ethidium monoazide bromide,EMA)处理菌液,沸水浴法制备细菌裂解液,优化PCR条件,建立一种快速、有效的O157:H7活菌EMA-PCR检测方法.结果显示:EMA-PCR可从rfbE基因阳性菌株CVCC248和两株临床分离菌株cd0912、cd0803中扩增出大小为495 bp的特异性条带,检测灵敏度可达12 CFU/mL.经EMA处理,从含有1％～100％O157:H7 CVCC248活菌混合悬液制备的DNA中均可扩增出目的片段.因此,成功建立了肠出血性大肠杆菌O157:H7的EMA-PCR检测方法；该方法可避免因分析的样品中含有死细菌而造成的假阳性检测结果,检测的准确性和真实性较传统PCR大大提高.O157:H7 EMA-PCR技术的建立为O157:H7的临床诊断提供了新的方法,具有重要的实际应用价值和良好的应用前景.
장출혈성대장간균O157:H7시일충중요적인축공환전염병병원균.위건립일충특이、령민적O157:H7신형검측기술,이O157항원기인(rfbE기인)위모판설계특이성인물,이용첩담추화을정(ethidium monoazide bromide,EMA)처리균액,비수욕법제비세균렬해액,우화PCR조건,건립일충쾌속、유효적O157:H7활균EMA-PCR검측방법.결과현시:EMA-PCR가종rfbE기인양성균주CVCC248화량주림상분리균주cd0912、cd0803중확증출대소위495 bp적특이성조대,검측령민도가체12 CFU/mL.경EMA처리,종함유1％～100％O157:H7 CVCC248활균혼합현액제비적DNA중균가확증출목적편단.인차,성공건립료장출혈성대장간균O157:H7적EMA-PCR검측방법；해방법가피면인분석적양품중함유사세균이조성적가양성검측결과,검측적준학성화진실성교전통PCR대대제고.O157:H7 EMA-PCR기술적건립위O157:H7적림상진단제공료신적방법,구유중요적실제응용개치화량호적응용전경.