微生物学通报
微生物學通報
미생물학통보
MICROBIOLOGY
2007年
3期
528-532
,共5页
β-甘露聚糖酶%基因克隆%定点突变
β-甘露聚糖酶%基因剋隆%定點突變
β-감로취당매%기인극륭%정점돌변
manA是编码β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC 3.2.1.78)的基因.将枯草杆菌A33株的manA基因插入到pET-32a载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了异源非融合表达,表达活力为41.58U/mL.为了提高酶的表达活力,当采用PCR介导的定点突变技术将该基因第2号密码子CUU突变为GUU,构建成突变表达载体pET-32a-manA*并转入大肠杆菌BL21(DE3)中表达,目标酶表达活力增加到138.65U/mL.说明当β-甘露聚糖酶N端第二号氨基酸由亮氨酸突变为缬氨酸后,酶在大肠杆菌中的表达活力大大提高.推测是由于突变后的β-甘露聚糖酶在大肠杆菌中的稳定性增强所致.突变表达的β-甘露聚糖酶最适作用温度和pH值并没有发生明显改变.
manA是編碼β-甘露聚糖酶(β-1,4-mannan mannohydrolase EC 3.2.1.78)的基因.將枯草桿菌A33株的manA基因插入到pET-32a載體,併在大腸桿菌BL21(DE3)中實現瞭異源非融閤錶達,錶達活力為41.58U/mL.為瞭提高酶的錶達活力,噹採用PCR介導的定點突變技術將該基因第2號密碼子CUU突變為GUU,構建成突變錶達載體pET-32a-manA*併轉入大腸桿菌BL21(DE3)中錶達,目標酶錶達活力增加到138.65U/mL.說明噹β-甘露聚糖酶N耑第二號氨基痠由亮氨痠突變為纈氨痠後,酶在大腸桿菌中的錶達活力大大提高.推測是由于突變後的β-甘露聚糖酶在大腸桿菌中的穩定性增彊所緻.突變錶達的β-甘露聚糖酶最適作用溫度和pH值併沒有髮生明顯改變.
manA시편마β-감로취당매(β-1,4-mannan mannohydrolase EC 3.2.1.78)적기인.장고초간균A33주적manA기인삽입도pET-32a재체,병재대장간균BL21(DE3)중실현료이원비융합표체,표체활력위41.58U/mL.위료제고매적표체활력,당채용PCR개도적정점돌변기술장해기인제2호밀마자CUU돌변위GUU,구건성돌변표체재체pET-32a-manA*병전입대장간균BL21(DE3)중표체,목표매표체활력증가도138.65U/mL.설명당β-감로취당매N단제이호안기산유량안산돌변위힐안산후,매재대장간균중적표체활력대대제고.추측시유우돌변후적β-감로취당매재대장간균중적은정성증강소치.돌변표체적β-감로취당매최괄작용온도화pH치병몰유발생명현개변.
