生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
4期
485-487
,共3页
田利源%李秀丽%汪莉%王玉民
田利源%李秀麗%汪莉%王玉民
전리원%리수려%왕리%왕옥민
精囊自身抗原%精子获能%原核表达%纯化
精囊自身抗原%精子穫能%原覈錶達%純化
정낭자신항원%정자획능%원핵표체%순화
目的:在原核细胞中表达小鼠精囊自身抗原(SVA),并对表达产物进行鉴定和纯化.方法:提取小鼠附睾组织总RNA.RT-PCR获得SVA的cDNA,设计并合成特异引物序列,进一步扩增出不合信号肽的SVA编码序列,连入原核表达载体pET28a中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western印迹分析表达产物His-SVA,采用Ni-NTA纯化融合蛋白His-SVA.结果:原核表达获得融合6个组氨酸的SVA,用抗His单克隆抗体进行Western印迹鉴定,检测到相对分子质量约18x103的目的蛋白,与理论值一致;经Ni-NTA纯化获得较高纯度的His-SVA融合蛋白.结论:获得了在大肠杆菌中表达的小鼠附睾蛋白SVA,为后续研究其对小鼠生殖的影响奠定了基础.
目的:在原覈細胞中錶達小鼠精囊自身抗原(SVA),併對錶達產物進行鑒定和純化.方法:提取小鼠附睪組織總RNA.RT-PCR穫得SVA的cDNA,設計併閤成特異引物序列,進一步擴增齣不閤信號肽的SVA編碼序列,連入原覈錶達載體pET28a中,經酶切和測序鑒定正確的重組質粒轉化大腸桿菌Rosetta(DE3)感受態細胞,IPTG誘導錶達,Western印跡分析錶達產物His-SVA,採用Ni-NTA純化融閤蛋白His-SVA.結果:原覈錶達穫得融閤6箇組氨痠的SVA,用抗His單剋隆抗體進行Western印跡鑒定,檢測到相對分子質量約18x103的目的蛋白,與理論值一緻;經Ni-NTA純化穫得較高純度的His-SVA融閤蛋白.結論:穫得瞭在大腸桿菌中錶達的小鼠附睪蛋白SVA,為後續研究其對小鼠生殖的影響奠定瞭基礎.
목적:재원핵세포중표체소서정낭자신항원(SVA),병대표체산물진행감정화순화.방법:제취소서부고조직총RNA.RT-PCR획득SVA적cDNA,설계병합성특이인물서렬,진일보확증출불합신호태적SVA편마서렬,련입원핵표체재체pET28a중,경매절화측서감정정학적중조질립전화대장간균Rosetta(DE3)감수태세포,IPTG유도표체,Western인적분석표체산물His-SVA,채용Ni-NTA순화융합단백His-SVA.결과:원핵표체획득융합6개조안산적SVA,용항His단극륭항체진행Western인적감정,검측도상대분자질량약18x103적목적단백,여이론치일치;경Ni-NTA순화획득교고순도적His-SVA융합단백.결론:획득료재대장간균중표체적소서부고단백SVA,위후속연구기대소서생식적영향전정료기출.
