生物技术通讯
生物技術通訊
생물기술통신
LETTERS IN BIOTECHNOLOGY
2009年
4期
462-466
,共5页
姚学勤%薛冲%赵洪亮%何庆%孙博%刘志敏
姚學勤%薛遲%趙洪亮%何慶%孫博%劉誌敏
요학근%설충%조홍량%하경%손박%류지민
巴斯德毕赤酵母%甘油阻遏%限制酶介导整合技术%TAII-PcR
巴斯德畢赤酵母%甘油阻遏%限製酶介導整閤技術%TAII-PcR
파사덕필적효모%감유조알%한제매개도정합기술%TAII-PcR
目的:分离克隆并鉴定巴斯德毕赤酵母表达系统中甘油阻遏相关基因.方法:PCR扩增LacZ基因,克隆至pPIC9载体,构建pPIC9-LacZ表达载体,经Sal I线性化后转化巴斯德毕赤酵母GSll5,构建GSll5-LacZ模式菌株;用限制酶介导整合(REMl)技术使GSll5-LacZ菌体基因组产生随机突变,筛选甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体;Southem blot鉴定GSll5-LacZA基因组.用质粒拯救技术和TAIL-PCR克隆未知基因序列并测序.结果:得到甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵体,经Southern blot分析,突变仅发生在1个基因中;通过质粒拯救和TAIL-PCR,分离得到阻遏相关基因GR1,共2 863bp,经在线BLAST,发现其编码一种过氧化物酶体自吞噬相关蛋白.结论:分离得到阻遏相关基因GRI,与过氧化物酶体自吞噬相关,提示过氧化物酶体自吞噬相关基因可能对醇氧化酶启动子AOXl的转录活性有影响.
目的:分離剋隆併鑒定巴斯德畢赤酵母錶達繫統中甘油阻遏相關基因.方法:PCR擴增LacZ基因,剋隆至pPIC9載體,構建pPIC9-LacZ錶達載體,經Sal I線性化後轉化巴斯德畢赤酵母GSll5,構建GSll5-LacZ模式菌株;用限製酶介導整閤(REMl)技術使GSll5-LacZ菌體基因組產生隨機突變,篩選甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵體;Southem blot鑒定GSll5-LacZA基因組.用質粒拯救技術和TAIL-PCR剋隆未知基因序列併測序.結果:得到甘油去阻遏的GSll5-LacZA茵體,經Southern blot分析,突變僅髮生在1箇基因中;通過質粒拯救和TAIL-PCR,分離得到阻遏相關基因GR1,共2 863bp,經在線BLAST,髮現其編碼一種過氧化物酶體自吞噬相關蛋白.結論:分離得到阻遏相關基因GRI,與過氧化物酶體自吞噬相關,提示過氧化物酶體自吞噬相關基因可能對醇氧化酶啟動子AOXl的轉錄活性有影響.
목적:분리극륭병감정파사덕필적효모표체계통중감유조알상관기인.방법:PCR확증LacZ기인,극륭지pPIC9재체,구건pPIC9-LacZ표체재체,경Sal I선성화후전화파사덕필적효모GSll5,구건GSll5-LacZ모식균주;용한제매개도정합(REMl)기술사GSll5-LacZ균체기인조산생수궤돌변,사선감유거조알적GSll5-LacZA인체;Southem blot감정GSll5-LacZA기인조.용질립증구기술화TAIL-PCR극륭미지기인서렬병측서.결과:득도감유거조알적GSll5-LacZA인체,경Southern blot분석,돌변부발생재1개기인중;통과질립증구화TAIL-PCR,분리득도조알상관기인GR1,공2 863bp,경재선BLAST,발현기편마일충과양화물매체자탄서상관단백.결론:분리득도조알상관기인GRI,여과양화물매체자탄서상관,제시과양화물매체자탄서상관기인가능대순양화매계동자AOXl적전록활성유영향.
