中国动物检疫
中國動物檢疫
중국동물검역
CHINA ANMAL QUARANTINE
2010年
1期
35-38
,共4页
项黎丽%闫若潜%盛敏%程增青
項黎麗%閆若潛%盛敏%程增青
항려려%염약잠%성민%정증청
犬α干扰素%克隆%表达%纯化
犬α榦擾素%剋隆%錶達%純化
견α간우소%극륭%표체%순화
根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含Sph Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaI FN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoR I酶切鉴定,初步证实为CaI FN-α,用Sph Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、Sph I和Hind Ⅲ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了Ca I FN-α,构建了重组表达质粒PQE30/Ca I FN-α.将重组表达菌液培养至0D600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析Ca I FN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右.将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的Ca IFN-α蛋白.本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础.
根據DDBJ/GenBank基因庫中已登錄的犬α榦擾素序列,設計瞭含Sph Ⅰ和Hind Ⅲ酶切位點的一對引物,採取聚閤酶鏈式反應(PCR)技術以犬基因組DNA為模闆進行瞭CaI FN-α的成熟肽基因的剋隆,擴增產物與剋隆載體pGEM-T Easy Vector連接後轉入大腸桿菌JM109,經PCR鑒定和EcoR I酶切鑒定,初步證實為CaI FN-α,用Sph Ⅰ和Hind Ⅲ雙酶切重組質粒,將目的片段與錶達載體pQE30連接,然後轉入大腸桿菌JM109,經PCR鑒定、Sph I和Hind Ⅲ雙酶切鑒定、序列測定證實已經成功剋隆瞭Ca I FN-α,構建瞭重組錶達質粒PQE30/Ca I FN-α.將重組錶達菌液培養至0D600為0.5時加入IPTG誘導錶達,經SDS-PAGE分析Ca I FN-α在大腸桿菌中得到瞭錶達,錶達的目的蛋白以包涵體形式存在,錶達量約佔細菌總量的20%左右.將誘導錶達的菌液經超聲裂解、變性、複性、透析後,得較純的Ca IFN-α蛋白.本研究為以後CaIFN-α的活性及臨床應用研究奠定瞭基礎.
근거DDBJ/GenBank기인고중이등록적견α간우소서렬,설계료함Sph Ⅰ화Hind Ⅲ매절위점적일대인물,채취취합매련식반응(PCR)기술이견기인조DNA위모판진행료CaI FN-α적성숙태기인적극륭,확증산물여극륭재체pGEM-T Easy Vector련접후전입대장간균JM109,경PCR감정화EcoR I매절감정,초보증실위CaI FN-α,용Sph Ⅰ화Hind Ⅲ쌍매절중조질립,장목적편단여표체재체pQE30련접,연후전입대장간균JM109,경PCR감정、Sph I화Hind Ⅲ쌍매절감정、서렬측정증실이경성공극륭료Ca I FN-α,구건료중조표체질립PQE30/Ca I FN-α.장중조표체균액배양지0D600위0.5시가입IPTG유도표체,경SDS-PAGE분석Ca I FN-α재대장간균중득도료표체,표체적목적단백이포함체형식존재,표체량약점세균총량적20%좌우.장유도표체적균액경초성렬해、변성、복성、투석후,득교순적Ca IFN-α단백.본연구위이후CaIFN-α적활성급림상응용연구전정료기출.
