CAJ | 학술논문

目的拟建立体外高通量的用于筛选不同作用机制的5-脂氧化酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)抑制剂的方法.方法以花生四烯酸为底物,2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸为荧光反应物,建立荧光测活方法,并通过不加Fe3+和外加10mmol/L Fe3+的方法建立两种不同的5-LOX酶反应体系.结果 5-脂氧化酶在不加Fe3+和外加10mmol/L Fe3+的反应体系中的信号/本底(S/B)值分别为5.02和37.81,两种反应的Z’因子值均约为0.7.5-脂氧化酶铁离子螯合抑制剂齐留通在未加Fe3+的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC5o值为0.21μM,在外加10mmol/L Fe3+的反应体系对酶无抑制作用.非铁离子螯合抑制剂去甲二氢愈创木酸在两种反应体系对酶均有抑制作用,其IC5o值分别为0.52和0.93μM.利用该方法从微生物代谢产物中筛选到两个活性化合物WF-5239和Trivaric acid,其中化合物WF-5239在未加Fe3+的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC50值为2μmol/L,在外加10mmol/L Fe3+的反应体系对酶无抑制作用,推测可能为铁离子螯合型抑制剂.化合物Trivaric acid在两个筛选体系对酶的抑制作用基本一致,其IC50值均约为5.36μmol/L,推测可能为非铁离子螯合型抑制剂.结论本研究建立了灵敏、稳定的可用于筛选不同作用机制5-LOX抑制剂的方法.
목적 의건입체외고통량적용우사선불동작용궤제적5-지양화매(5-1ipoxygenase,5-LOX)억제제적방법.방법 이화생사희산위저물,2,7-이록이경형광소을선을산위형광반응물,건립형광측활방법,병통과불가Fe3+화외가10mmol/L Fe3+적방법건립량충불동적5-LOX매반응체계.결과 5-지양화매재불가Fe3+화외가10mmol/L Fe3+적반응체계중적신호/본저(S/B)치분별위5.02화37.81,량충반응적Z’인자치균약위0.7.5-지양화매철리자오합억제제제류통재미가Fe3+적반응체계대매유강적억제활성,기IC5o치위0.21μM,재외가10mmol/L Fe3+적반응체계대매무억제작용.비철리자오합억제제거갑이경유창목산재량충반응체계대매균유억제작용,기IC5o치분별위0.52화0.93μM.이용해방법종미생물대사산물중사선도량개활성화합물WF-5239화Trivaric acid,기중화합물WF-5239재미가Fe3+적반응체계대매유강적억제활성,기IC50치위2μmol/L,재외가10mmol/L Fe3+적반응체계대매무억제작용,추측가능위철리자오합형억제제.화합물Trivaric acid재량개사선체계대매적억제작용기본일치,기IC50치균약위5.36μmol/L,추측가능위비철리자오합형억제제.결론 본연구건립료령민、은정적가용우사선불동작용궤제5-LOX억제제적방법.