CAJ | 학술논문

蜕皮调节转录因子(hormone receptor 3,HR3)在昆虫蜕皮过程中启动蜕皮相关早期基因簇表达,并抑制蜕皮相关晚期基因簇表达,对昆虫蜕皮级联反应起着关键的调控作用.利用合成的特异性引物通过RT-PCR扩增了棉铃虫Helicoverpa armigera蜕皮调节转录因子(HHR3),并与pGEX-4T-1载体连接,在大肠杆菌Escherichia coli DH5α内进行扩增,经过PCR筛选获得了HHR3-pGEX-4T-1重组质粒.用该质粒转化大肠杆菌表达菌株BL21并进行诱导表达,获得了与谷胱甘肽-S转移酶(GST)融合表达的HHR3包涵体,分子量在94 kD左右,通过无离子去垢剂CAPS(3-[cyclohexylamino]-1-propanesulfonic acid)变性、复性后获得了可溶性GST-HHR3融合蛋白,经凝血酶裂解和SDS-PAGE分离得到纯化的HHR3,经蛋白质N-端测序确认表达正确.用重组表达的HHR3免疫家兔,制备了兔抗HHR3多克隆抗体,免疫印迹检测显示该抗体对HHR3有特异性识别能力,可以用于HHR3功能与调控等下游研究.免疫印迹检测结果还表明,HHR3在5龄向6龄蜕皮的幼虫脂肪体中高表达,在进入6龄24 h的幼虫脂肪体中含量明显下降,在6龄72 h的幼虫中肠中没有检测到HHR3表达;成虫卵巢中有HHR3表达.
세피조절전록인자(hormone receptor 3,HR3)재곤충세피과정중계동세피상관조기기인족표체,병억제세피상관만기기인족표체,대곤충세피급련반응기착관건적조공작용.이용합성적특이성인물통과RT-PCR확증료면령충Helicoverpa armigera세피조절전록인자(HHR3),병여pGEX-4T-1재체련접,재대장간균Escherichia coli DH5α내진행확증,경과PCR사선획득료HHR3-pGEX-4T-1중조질립.용해질립전화대장간균표체균주BL21병진행유도표체,획득료여곡광감태-S전이매(GST)융합표체적HHR3포함체,분자량재94 kD좌우,통과무리자거구제CAPS(3-[cyclohexylamino]-1-propanesulfonic acid)변성、복성후획득료가용성GST-HHR3융합단백,경응혈매렬해화SDS-PAGE분리득도순화적HHR3,경단백질N-단측서학인표체정학.용중조표체적HHR3면역가토,제비료토항HHR3다극륭항체,면역인적검측현시해항체대HHR3유특이성식별능력,가이용우HHR3공능여조공등하유연구.면역인적검측결과환표명,HHR3재5령향6령세피적유충지방체중고표체,재진입6령24 h적유충지방체중함량명현하강,재6령72 h적유충중장중몰유검측도HHR3표체;성충란소중유HHR3표체.