科学技术与工程
科學技術與工程
과학기술여공정
SCIENCE TECHNOLOGY AND ENGINEERING
2005年
6期
337-341
,共5页
秦云%陈苏民%关路媛%陈南春%赵玮钦%宋庆贺
秦雲%陳囌民%關路媛%陳南春%趙瑋欽%宋慶賀
진운%진소민%관로원%진남춘%조위흠%송경하
重组人骨形成蛋白4成熟肽%恒溶氧发酵%蛋白质表达%蛋白质纯化
重組人骨形成蛋白4成熟肽%恆溶氧髮酵%蛋白質錶達%蛋白質純化
중조인골형성단백4성숙태%항용양발효%단백질표체%단백질순화
含有编码人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA表达质粒的菌株,经50代传代,质粒不丢失,仍然稳定高表达hBMP-4m.将此菌株导入15 LNBS发酵罐中进行恒溶氧高密度发酵、诱导表达,测定发酵菌液OD600值为43.5,离心收集菌体,PAGE电泳结果hBMP-4m占细菌总蛋白量的39%.悬浮所收集的菌体、裂菌,洗涤后的包涵体中hBMP-4m占蛋白量的85%.将少量包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解分别上SP阳离子和Q阴离子交换柱,用连续盐浓度的洗脱液洗脱蛋白,收集各蛋白峰做蛋白电泳分析,找到洗脱液的最合适盐浓度.然后将全部包涵体用8 mol尿素缓冲液溶解,上阳离子交换柱SP柱,以最佳盐浓度洗脱液洗脱,获得纯度为91%的hBMP-4m.再上阴离子交换柱Q柱,最佳盐浓度洗脱液洗脱后,所得hBMP-4m纯度为98%.
含有編碼人骨形成蛋白4成熟肽(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA錶達質粒的菌株,經50代傳代,質粒不丟失,仍然穩定高錶達hBMP-4m.將此菌株導入15 LNBS髮酵罐中進行恆溶氧高密度髮酵、誘導錶達,測定髮酵菌液OD600值為43.5,離心收集菌體,PAGE電泳結果hBMP-4m佔細菌總蛋白量的39%.懸浮所收集的菌體、裂菌,洗滌後的包涵體中hBMP-4m佔蛋白量的85%.將少量包涵體用8 mol尿素緩遲液溶解分彆上SP暘離子和Q陰離子交換柱,用連續鹽濃度的洗脫液洗脫蛋白,收集各蛋白峰做蛋白電泳分析,找到洗脫液的最閤適鹽濃度.然後將全部包涵體用8 mol尿素緩遲液溶解,上暘離子交換柱SP柱,以最佳鹽濃度洗脫液洗脫,穫得純度為91%的hBMP-4m.再上陰離子交換柱Q柱,最佳鹽濃度洗脫液洗脫後,所得hBMP-4m純度為98%.
함유편마인골형성단백4성숙태(Bone morphogenetic protein 4 mature peptide,hBMP-4m)cDNA표체질립적균주,경50대전대,질립불주실,잉연은정고표체hBMP-4m.장차균주도입15 LNBS발효관중진행항용양고밀도발효、유도표체,측정발효균액OD600치위43.5,리심수집균체,PAGE전영결과hBMP-4m점세균총단백량적39%.현부소수집적균체、렬균,세조후적포함체중hBMP-4m점단백량적85%.장소량포함체용8 mol뇨소완충액용해분별상SP양리자화Q음리자교환주,용련속염농도적세탈액세탈단백,수집각단백봉주단백전영분석,조도세탈액적최합괄염농도.연후장전부포함체용8 mol뇨소완충액용해,상양리자교환주SP주,이최가염농도세탈액세탈,획득순도위91%적hBMP-4m.재상음리자교환주Q주,최가염농도세탈액세탈후,소득hBMP-4m순도위98%.
