南方医科大学学报
南方醫科大學學報
남방의과대학학보
JOURNAL OF SOUTHERN MEDICAL UNIVERSITY
2008年
7期
1180-1183
,共4页
李华%言慧%陈白虹%刘敏%陈晓光
李華%言慧%陳白虹%劉敏%陳曉光
리화%언혜%진백홍%류민%진효광
弓形虫%SAG1%发酵%表达%纯化
弓形蟲%SAG1%髮酵%錶達%純化
궁형충%SAG1%발효%표체%순화
目的 探讨弓形虫SAG1在大肠杆菌中的高密度发酵表达及其批量制备流程.方法 利用高密度发酵大肠杆菌批量表达rSAG1,经Ni-NTA、Sephadex G-75及切胶等纯化工艺对重组蛋白进行纯化,用Western blotting鉴定其免疫反应性,ELISA验证rSAG1检测弓形虫抗体的敏感性与特异性.结果 高密度发酵诱导4 h后工程菌液的OD600达到20.21:平均每升发酵液可收获工程菌26.10 g;目标蛋白的表达量占菌体蛋白的25.82%;经Ni-NTA、Ni-NTA联合Sephadex G-75及Ni-NTA联合切胶纯化的rSAG1蛋白纯度分别为72.36%、98.54%和97.39%;Western blotting结果显示联合纯化的rSAG1与弓形虫免疫兔血清晕单一反应条带,与正常兔血清未出现反应带;Ni-NTA联合Sephadex-G75纯化的rSAG1对25例感染小鼠血清和38例抗体阳性患者血清的检出率分别为96%和94.7%.结论 利用高密度发酵技术高效表达、Ni-NTA联合Sephadex G-75纯化的rSAG1具有较高纯度和良好的免疫反应性,该工艺可以用于rsAG1抗原的批量生产.
目的 探討弓形蟲SAG1在大腸桿菌中的高密度髮酵錶達及其批量製備流程.方法 利用高密度髮酵大腸桿菌批量錶達rSAG1,經Ni-NTA、Sephadex G-75及切膠等純化工藝對重組蛋白進行純化,用Western blotting鑒定其免疫反應性,ELISA驗證rSAG1檢測弓形蟲抗體的敏感性與特異性.結果 高密度髮酵誘導4 h後工程菌液的OD600達到20.21:平均每升髮酵液可收穫工程菌26.10 g;目標蛋白的錶達量佔菌體蛋白的25.82%;經Ni-NTA、Ni-NTA聯閤Sephadex G-75及Ni-NTA聯閤切膠純化的rSAG1蛋白純度分彆為72.36%、98.54%和97.39%;Western blotting結果顯示聯閤純化的rSAG1與弓形蟲免疫兔血清暈單一反應條帶,與正常兔血清未齣現反應帶;Ni-NTA聯閤Sephadex-G75純化的rSAG1對25例感染小鼠血清和38例抗體暘性患者血清的檢齣率分彆為96%和94.7%.結論 利用高密度髮酵技術高效錶達、Ni-NTA聯閤Sephadex G-75純化的rSAG1具有較高純度和良好的免疫反應性,該工藝可以用于rsAG1抗原的批量生產.
목적 탐토궁형충SAG1재대장간균중적고밀도발효표체급기비량제비류정.방법 이용고밀도발효대장간균비량표체rSAG1,경Ni-NTA、Sephadex G-75급절효등순화공예대중조단백진행순화,용Western blotting감정기면역반응성,ELISA험증rSAG1검측궁형충항체적민감성여특이성.결과 고밀도발효유도4 h후공정균액적OD600체도20.21:평균매승발효액가수획공정균26.10 g;목표단백적표체량점균체단백적25.82%;경Ni-NTA、Ni-NTA연합Sephadex G-75급Ni-NTA연합절효순화적rSAG1단백순도분별위72.36%、98.54%화97.39%;Western blotting결과현시연합순화적rSAG1여궁형충면역토혈청훈단일반응조대,여정상토혈청미출현반응대;Ni-NTA연합Sephadex-G75순화적rSAG1대25례감염소서혈청화38례항체양성환자혈청적검출솔분별위96%화94.7%.결론 이용고밀도발효기술고효표체、Ni-NTA연합Sephadex G-75순화적rSAG1구유교고순도화량호적면역반응성,해공예가이용우rsAG1항원적비량생산.
