生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2010年
8期
174-179
,共6页
刘志玲%陈茹%邱索平%马静云%曾碧健%周科
劉誌玲%陳茹%邱索平%馬靜雲%曾碧健%週科
류지령%진여%구색평%마정운%증벽건%주과
牛流行热病毒%LUXTM%荧光引物%实时荧光RT-PCR
牛流行熱病毒%LUXTM%熒光引物%實時熒光RT-PCR
우류행열병독%LUXTM%형광인물%실시형광RT-PCR
采用LUXTM荧光PCR技术原理,以牛流行热病毒(BEFV)糖蛋白抗原G基因保守序列为模板设计特异荧光PCR扩增引物,建立BEFV LUXTM实时荧光RT-PCR快速检测方法.试验结果显示,所建立的荧光RT-PCR可特异检测牛流行热病毒RNA,而对蓝舌病病毒、牛病毒性腹泻-粘膜病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛白血病病毒以及与BEFV同种属的狂犬病病毒核酸检测呈阴性反应.敏感性试验表明LUXTM荧光RT-PCR对BEFV RNA的检测敏感性比常规RT-PCR方法提高达100倍以上.该LUXTM荧光RT-PCR的批内检测变异系数0.64%-1.17%,批间检测变异系数均小于2%,表明检测体系稳定、重复性好.通过人工添加灭活病毒液的方法制备30份模拟感染牛血清样品,采用上述所建立的BEFV LUXTM荧光RT-PCR方法检测均呈阳性.
採用LUXTM熒光PCR技術原理,以牛流行熱病毒(BEFV)糖蛋白抗原G基因保守序列為模闆設計特異熒光PCR擴增引物,建立BEFV LUXTM實時熒光RT-PCR快速檢測方法.試驗結果顯示,所建立的熒光RT-PCR可特異檢測牛流行熱病毒RNA,而對藍舌病病毒、牛病毒性腹瀉-粘膜病病毒、水泡性口炎病毒、口蹄疫病毒、牛白血病病毒以及與BEFV同種屬的狂犬病病毒覈痠檢測呈陰性反應.敏感性試驗錶明LUXTM熒光RT-PCR對BEFV RNA的檢測敏感性比常規RT-PCR方法提高達100倍以上.該LUXTM熒光RT-PCR的批內檢測變異繫數0.64%-1.17%,批間檢測變異繫數均小于2%,錶明檢測體繫穩定、重複性好.通過人工添加滅活病毒液的方法製備30份模擬感染牛血清樣品,採用上述所建立的BEFV LUXTM熒光RT-PCR方法檢測均呈暘性.
채용LUXTM형광PCR기술원리,이우류행열병독(BEFV)당단백항원G기인보수서렬위모판설계특이형광PCR확증인물,건립BEFV LUXTM실시형광RT-PCR쾌속검측방법.시험결과현시,소건립적형광RT-PCR가특이검측우류행열병독RNA,이대람설병병독、우병독성복사-점막병병독、수포성구염병독、구제역병독、우백혈병병독이급여BEFV동충속적광견병병독핵산검측정음성반응.민감성시험표명LUXTM형광RT-PCR대BEFV RNA적검측민감성비상규RT-PCR방법제고체100배이상.해LUXTM형광RT-PCR적비내검측변이계수0.64%-1.17%,비간검측변이계수균소우2%,표명검측체계은정、중복성호.통과인공첨가멸활병독액적방법제비30빈모의감염우혈청양품,채용상술소건립적BEFV LUXTM형광RT-PCR방법검측균정양성.
