CAJ | 학술논문

为了研究合浦珠母贝(Pincatada fucata)的先天免疫调控机制,利用cDNA文库筛选和重测序技术克隆了1个合浦珠母贝组织蛋白酶L的全长cDNA序列(命名为poCL2).poCL2 cDNA全长1 094bp,5'-非编码区(untranslated region,UTR)长21 bp,3'-UTR长80 bp,开放阅读框(Open reading frame,ORF)为993 bp,编码330个氨基酸组成的多肽链,分子量为37.1 kD,理论等电点为6.9.poCL2蛋白由信号肽(Met1-Ala16)、前体域(Arg17-Asp113)和成熟域(Leu114-Val330)三部分组成,存在-个潜在的糖基化位点(Asn97),6个底物结合位点(Leu182,Met183,Ala249,Leu275,Gly278和Ser324),1个由半胱氨酸(Cys138)、组氨酸(His277)和天冬酰胺(Asn297)残基构成的催化位点和2个组织蛋白酶L签名序列(E42X3RX3WX2NX3IX3N61和G74X1NX1YX1D80).同源性分析表明,poCL2氨基酸序列与其他物种高度保守,相似性在61.5%～73.9%之间,同源性在44.4%～59.8%之间.进化分析显示,poCL2与其他无脊椎动物的组织蛋白酶L聚为一支,和淡水螺(Radix peregra)亲缘关系最近.组织表达分析表明poCL2 mRNA在消化腺、外套膜、性腺、闭壳肌、肠、血淋巴和鳃组织中均表达,外套膜表达量最高.应激实验表明,经溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)或脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后,poCL2 mRNA在消化腺中的表达量显著上调,说明poCL2参与了合浦珠母贝的先天免疫应答反应,暗示其在合浦珠母贝先天免疫调控中发挥重要作用.
위료연구합포주모패(Pincatada fucata)적선천면역조공궤제,이용cDNA문고사선화중측서기술극륭료1개합포주모패조직단백매L적전장cDNA서렬(명명위poCL2).poCL2 cDNA전장1 094bp,5'-비편마구(untranslated region,UTR)장21 bp,3'-UTR장80 bp,개방열독광(Open reading frame,ORF)위993 bp,편마330개안기산조성적다태련,분자량위37.1 kD,이론등전점위6.9.poCL2단백유신호태(Met1-Ala16)、전체역(Arg17-Asp113)화성숙역(Leu114-Val330)삼부분조성,존재-개잠재적당기화위점(Asn97),6개저물결합위점(Leu182,Met183,Ala249,Leu275,Gly278화Ser324),1개유반광안산(Cys138)、조안산(His277)화천동선알(Asn297)잔기구성적최화위점화2개조직단백매L첨명서렬(E42X3RX3WX2NX3IX3N61화G74X1NX1YX1D80).동원성분석표명,poCL2안기산서렬여기타물충고도보수,상사성재61.5%～73.9%지간,동원성재44.4%～59.8%지간.진화분석현시,poCL2여기타무척추동물적조직단백매L취위일지,화담수라(Radix peregra)친연관계최근.조직표체분석표명poCL2 mRNA재소화선、외투막、성선、폐각기、장、혈림파화새조직중균표체,외투막표체량최고.응격실험표명,경용조호균(Vibrio alginolyticus)혹지다당(Lipopolysaccharide,LPS)자격후,poCL2 mRNA재소화선중적표체량현저상조,설명poCL2삼여료합포주모패적선천면역응답반응,암시기재합포주모패선천면역조공중발휘중요작용.