医学分子生物学杂志
醫學分子生物學雜誌
의학분자생물학잡지
FOREIGN MEDICAL SCIENCES
2010年
6期
493-498
,共6页
乐克平%孙晓青%陈仁富%陈伟%孙晓磊
樂剋平%孫曉青%陳仁富%陳偉%孫曉磊
악극평%손효청%진인부%진위%손효뢰
FasL基因%重组慢病毒载体%树突状细胞%移植免疫耐受
FasL基因%重組慢病毒載體%樹突狀細胞%移植免疫耐受
FasL기인%중조만병독재체%수돌상세포%이식면역내수
目的 探讨FasL基因重组慢病毒载体感染SD大鼠树突状细胞的效率和FasI 蛋白的表达情况,为进一步研究转FasL基因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受和保护移植物打下基础.方法 将培养一周的细胞重铺于六孔板中,每孔细胞数量为5×105,24 h后观察,细胞适合感染,按照MOI=10感染细胞,使用GFP阳性对照质粒作对照实验,感染24 h后,培养皿中添加1 ml新鲜培养基,每隔1 d加细胞因子继续培养,荧光显微镜观察荧光强度和数量,添加病毒液后10 d收集细胞进行实时定量检测和WB检测.结果 FasL基困重组慢病毒载体感染DC 8 d后,细胞开始出现荧光,10 d感染效率为100%;实时定量PCR检测瞬时转染后目的 基因的表达显示以细胞的1.00%为参照,Cell+FasL质粒为167.03%;免疫印迹检测转染后FasL蛋白的表达显示以细胞的1.00%为参照,细胞+FasL质粒为34.15%.结论 FasL基因重组慢病毒载体成功感染DC,实时定量PCR及Western印迹证实感染的Dc表达FasL明显提高.为进一步研究转FasL摹因在同种异体器官移植中诱导免疫耐受和保护移植物打下基础.
目的 探討FasL基因重組慢病毒載體感染SD大鼠樹突狀細胞的效率和FasI 蛋白的錶達情況,為進一步研究轉FasL基因在同種異體器官移植中誘導免疫耐受和保護移植物打下基礎.方法 將培養一週的細胞重鋪于六孔闆中,每孔細胞數量為5×105,24 h後觀察,細胞適閤感染,按照MOI=10感染細胞,使用GFP暘性對照質粒作對照實驗,感染24 h後,培養皿中添加1 ml新鮮培養基,每隔1 d加細胞因子繼續培養,熒光顯微鏡觀察熒光彊度和數量,添加病毒液後10 d收集細胞進行實時定量檢測和WB檢測.結果 FasL基睏重組慢病毒載體感染DC 8 d後,細胞開始齣現熒光,10 d感染效率為100%;實時定量PCR檢測瞬時轉染後目的 基因的錶達顯示以細胞的1.00%為參照,Cell+FasL質粒為167.03%;免疫印跡檢測轉染後FasL蛋白的錶達顯示以細胞的1.00%為參照,細胞+FasL質粒為34.15%.結論 FasL基因重組慢病毒載體成功感染DC,實時定量PCR及Western印跡證實感染的Dc錶達FasL明顯提高.為進一步研究轉FasL摹因在同種異體器官移植中誘導免疫耐受和保護移植物打下基礎.
목적 탐토FasL기인중조만병독재체감염SD대서수돌상세포적효솔화FasI 단백적표체정황,위진일보연구전FasL기인재동충이체기관이식중유도면역내수화보호이식물타하기출.방법 장배양일주적세포중포우륙공판중,매공세포수량위5×105,24 h후관찰,세포괄합감염,안조MOI=10감염세포,사용GFP양성대조질립작대조실험,감염24 h후,배양명중첨가1 ml신선배양기,매격1 d가세포인자계속배양,형광현미경관찰형광강도화수량,첨가병독액후10 d수집세포진행실시정량검측화WB검측.결과 FasL기곤중조만병독재체감염DC 8 d후,세포개시출현형광,10 d감염효솔위100%;실시정량PCR검측순시전염후목적 기인적표체현시이세포적1.00%위삼조,Cell+FasL질립위167.03%;면역인적검측전염후FasL단백적표체현시이세포적1.00%위삼조,세포+FasL질립위34.15%.결론 FasL기인중조만병독재체성공감염DC,실시정량PCR급Western인적증실감염적Dc표체FasL명현제고.위진일보연구전FasL모인재동충이체기관이식중유도면역내수화보호이식물타하기출.
