生物技术通报
生物技術通報
생물기술통보
BIOTECHNOLOGY BULLETIN
2011年
1期
213-218
,共6页
张烨%于在江%黄捷勤%唐启慧%陈禹保%辛丽%陈永坤%舒跃龙
張燁%于在江%黃捷勤%唐啟慧%陳禹保%辛麗%陳永坤%舒躍龍
장엽%우재강%황첩근%당계혜%진우보%신려%진영곤%서약룡
流感病毒H3N2%血凝素%神经氨酸酶%克隆表达
流感病毒H3N2%血凝素%神經氨痠酶%剋隆錶達
류감병독H3N2%혈응소%신경안산매%극륭표체
克隆、表达和鉴定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,为制备抗体和基因工程疫苗打下基础.在成功克隆流感病毒H3 N2全长HA,NA基因并测序的基础上,将部分基因序列克隆到表达载体pET32a(+)上,全基因序列克隆到表达载体pGEX4T-1上,构建了重组表达质粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,转化大肠杆菌BL21/Rosetta, IPTG诱导表达,利用Ni2+亲和层析柱和GSTrap 4B亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,并用Western blotting和ELISA方法检测其抗原性.结果显示,重组蛋白在大肠杆菌中可以高效表达,SDS-PAGE显示其相对分子质量与预计大小一致.ELISA和Western blotting试验证实,重组蛋白具有良好的抗原性.成功克隆和表达了流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可为流感病毒H3N2诊断试剂和疫苗的开发等进一步的研究提供参考.
剋隆、錶達和鑒定流感病毒H3N2 HA,NA基因序列,為製備抗體和基因工程疫苗打下基礎.在成功剋隆流感病毒H3 N2全長HA,NA基因併測序的基礎上,將部分基因序列剋隆到錶達載體pET32a(+)上,全基因序列剋隆到錶達載體pGEX4T-1上,構建瞭重組錶達質粒pET32a(+)/HA(截短),pET32a(+)/NA(截短),pGEX4T-1/HA,轉化大腸桿菌BL21/Rosetta, IPTG誘導錶達,利用Ni2+親和層析柱和GSTrap 4B親和層析柱對重組蛋白進行純化,併用Western blotting和ELISA方法檢測其抗原性.結果顯示,重組蛋白在大腸桿菌中可以高效錶達,SDS-PAGE顯示其相對分子質量與預計大小一緻.ELISA和Western blotting試驗證實,重組蛋白具有良好的抗原性.成功剋隆和錶達瞭流感病毒H3N2 HA、NA基因序列,可為流感病毒H3N2診斷試劑和疫苗的開髮等進一步的研究提供參攷.
극륭、표체화감정류감병독H3N2 HA,NA기인서렬,위제비항체화기인공정역묘타하기출.재성공극륭류감병독H3 N2전장HA,NA기인병측서적기출상,장부분기인서렬극륭도표체재체pET32a(+)상,전기인서렬극륭도표체재체pGEX4T-1상,구건료중조표체질립pET32a(+)/HA(절단),pET32a(+)/NA(절단),pGEX4T-1/HA,전화대장간균BL21/Rosetta, IPTG유도표체,이용Ni2+친화층석주화GSTrap 4B친화층석주대중조단백진행순화,병용Western blotting화ELISA방법검측기항원성.결과현시,중조단백재대장간균중가이고효표체,SDS-PAGE현시기상대분자질량여예계대소일치.ELISA화Western blotting시험증실,중조단백구유량호적항원성.성공극륭화표체료류감병독H3N2 HA、NA기인서렬,가위류감병독H3N2진단시제화역묘적개발등진일보적연구제공삼고.
