CAJ | 학술논문

目的:干扰wnt5a在Jurkat细胞中的表达,探讨wnt5a对Jurkat细胞增殖、细胞周期、凋亡的作用及其机制.方法:采用大肠杆菌BJ5183内同源重组的方法构建特异性干扰wnt5a的腺病毒Ad5-wnt5asi,感染Jurkat细胞.实验分为实验组(感染重组腺病毒的Jurkat细胞)、空载体组(感染腺病毒的Jurkat细胞)及空白对照组(Jurkat细胞).采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,RT-PCR检测各组细胞wnt5a、3-catenin、钙调蛋白依赖性激酶Ⅱ(Calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、cyclinD1、c -myc、survivin mRNA表达,Western blot检测干扰前后β-catenin、CaMKⅡ、cyclinD1蛋白表达.结果:(1)实验组细胞增殖与空载体组及空白对照组相比显著增高(P＜0.05).(2)实验组与其他两组相比,G1期细胞比例显著降低,S期细胞比例显著增多(P＜0.05),G2期细胞比例无明显差异(P＞0.05).实验组与其他两组相比,细胞凋亡率显著降低(P＜0.05).(3)实验组细胞wnt5a mRNA表达降低(55.52-0.61)%,差异有统计学意义(P＜0.05).(4)实验组与其他两组相比,CaMKⅡmRNA表达明显降低,β-catenin、cyclinD1、c-myc、survivin表达增高,差异具有统计学意义(P＜0.05).(5)CaMKⅡ、β-catenin、cyclinDl蛋白与mRNA表达变化一致.结论:靶向沉默wnt5a基因促进Jurkat细胞恶性增殖,抑制凋亡.作用机制可能为:下调wnt5a后,解除了非经典wrt信号通路对β-catenin的抑制,从而下游cyclinD1、c-myc、survivin靶基因上调,改变细胞周期并抑制凋亡,导致Jurkat细胞进一步增殖.
목적:간우wnt5a재Jurkat세포중적표체,탐토wnt5a대Jurkat세포증식、세포주기、조망적작용급기궤제.방법:채용대장간균BJ5183내동원중조적방법구건특이성간우wnt5a적선병독Ad5-wnt5asi,감염Jurkat세포.실험분위실험조(감염중조선병독적Jurkat세포)、공재체조(감염선병독적Jurkat세포)급공백대조조(Jurkat세포).채용MTT법검측세포증식,류식세포의검측세포주기급조망,RT-PCR검측각조세포wnt5a、3-catenin、개조단백의뢰성격매Ⅱ(Calmodulin dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)、cyclinD1、c -myc、survivin mRNA표체,Western blot검측간우전후β-catenin、CaMKⅡ、cyclinD1단백표체.결과:(1)실험조세포증식여공재체조급공백대조조상비현저증고(P＜0.05).(2)실험조여기타량조상비,G1기세포비례현저강저,S기세포비례현저증다(P＜0.05),G2기세포비례무명현차이(P＞0.05).실험조여기타량조상비,세포조망솔현저강저(P＜0.05).(3)실험조세포wnt5a mRNA표체강저(55.52-0.61)%,차이유통계학의의(P＜0.05).(4)실험조여기타량조상비,CaMKⅡmRNA표체명현강저,β-catenin、cyclinD1、c-myc、survivin표체증고,차이구유통계학의의(P＜0.05).(5)CaMKⅡ、β-catenin、cyclinDl단백여mRNA표체변화일치.결론:파향침묵wnt5a기인촉진Jurkat세포악성증식,억제조망.작용궤제가능위:하조wnt5a후,해제료비경전wrt신호통로대β-catenin적억제,종이하유cyclinD1、c-myc、survivin파기인상조,개변세포주기병억제조망,도치Jurkat세포진일보증식.