浙江农业学报
浙江農業學報
절강농업학보
ACTA AGRICULTURAE ZHEJIANGENSIS
2011年
5期
900-904
,共5页
魏跃%陈啸寅%王全智%陈劲枫
魏躍%陳嘯寅%王全智%陳勁楓
위약%진소인%왕전지%진경풍
热不对称交错PCR%6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶%黄瓜%上游序列
熱不對稱交錯PCR%6-燐痠葡萄糖痠脫氫酶%黃瓜%上遊序列
열불대칭교착PCR%6-린산포도당산탈경매%황과%상유서렬
运用改良的热不对称交错PCR( thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)对黄瓜6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase gene,6PGDH)的上游序列进行了克隆.与最初的TAIL-PCR相比较,主要改进之处有:(1)根据Primer 5.0软件计算结果从随机RAPD引物库中筛选出合适的上游引物,低严谨和高严谨反应中的退火温度也分别进行了调整；(2)将热不对称交替反应继续应用到第3轮PCR扩增反应中以提高特异目的条带和减少非目的条带.经过3轮PCR扩增反应最终获得位于黄瓜6PGDH起始密码子ATG上游长度为517 bp新序列.试验结果表明,应用改良TAIL-PCR能快速、有效地克隆与已知区域相邻的序列.
運用改良的熱不對稱交錯PCR( thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)對黃瓜6-燐痠葡萄糖痠脫氫酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase gene,6PGDH)的上遊序列進行瞭剋隆.與最初的TAIL-PCR相比較,主要改進之處有:(1)根據Primer 5.0軟件計算結果從隨機RAPD引物庫中篩選齣閤適的上遊引物,低嚴謹和高嚴謹反應中的退火溫度也分彆進行瞭調整；(2)將熱不對稱交替反應繼續應用到第3輪PCR擴增反應中以提高特異目的條帶和減少非目的條帶.經過3輪PCR擴增反應最終穫得位于黃瓜6PGDH起始密碼子ATG上遊長度為517 bp新序列.試驗結果錶明,應用改良TAIL-PCR能快速、有效地剋隆與已知區域相鄰的序列.
운용개량적열불대칭교착PCR( thermal asymmetric interlaced PCR,TAIL-PCR)대황과6-린산포도당산탈경매기인(6-phosphogluconate dehydrogenase gene,6PGDH)적상유서렬진행료극륭.여최초적TAIL-PCR상비교,주요개진지처유:(1)근거Primer 5.0연건계산결과종수궤RAPD인물고중사선출합괄적상유인물,저엄근화고엄근반응중적퇴화온도야분별진행료조정；(2)장열불대칭교체반응계속응용도제3륜PCR확증반응중이제고특이목적조대화감소비목적조대.경과3륜PCR확증반응최종획득위우황과6PGDH기시밀마자ATG상유장도위517 bp신서렬.시험결과표명,응용개량TAIL-PCR능쾌속、유효지극륭여이지구역상린적서렬.
