CAJ | 학술논문

现已发现杆状病毒可进入某些培养的哺乳动物细胞,这提示可将杆状病毒作为一种对哺乳动物细胞的新型基因转移载体.对杆状病毒转移载体的改造及对哺乳动物细胞的基因转移方式进行了进一步的研究.以绿色荧光蛋白基因为报告基因,利用Bac-to-Bac系统构建了分别含有正向和反向CMV启动子表达盒的两种重组杆状病毒.可观察到CMV启动子在Sf9细胞中可启动报告基因的表达,但表达效率较低.用重组杆状病毒感染后Sf9细胞的培养上清直接与HepG2细胞作用,以流式细胞术检测基因转移效率及荧光表达强度,发现这两种病毒在相同的感染复数下对HepG2细胞具有相似的基因转移及表达效率.同时,利用流式细胞术进一步研究了直接使用重组杆状病毒感染4d后Sf9细胞的培养上清对哺乳动物细胞进行基因转移的方法.通过对HepG2细胞的实验结果显示,将带毒Sf9细胞培养上清(1.2×107PFU/mL)用哺乳动物细胞培养基1倍稀释后,37℃下孵育靶细胞12h(moi=50),可达到较高的基因转移及表达效率,同时不会对细胞造成明显损伤.将重组杆状病毒与脂质体和逆转录病毒这两种系统对HepG2及CV1细胞的基因转移效率进行了比较,结果发现在同样未经浓缩等特殊处理的条件下重组杆状病毒对这两种细胞的基因转移效率是最高的.因此可以认为,经过适当改造后的Bac-to-Bac重组杆状病毒系统可作为一种对哺乳动物细胞简便高效的基因转移表达载体.
현이발현간상병독가진입모사배양적포유동물세포,저제시가장간상병독작위일충대포유동물세포적신형기인전이재체.대간상병독전이재체적개조급대포유동물세포적기인전이방식진행료진일보적연구.이록색형광단백기인위보고기인,이용Bac-to-Bac계통구건료분별함유정향화반향CMV계동자표체합적량충중조간상병독.가관찰도CMV계동자재Sf9세포중가계동보고기인적표체,단표체효솔교저.용중조간상병독감염후Sf9세포적배양상청직접여HepG2세포작용,이류식세포술검측기인전이효솔급형광표체강도,발현저량충병독재상동적감염복수하대HepG2세포구유상사적기인전이급표체효솔.동시,이용류식세포술진일보연구료직접사용중조간상병독감염4d후Sf9세포적배양상청대포유동물세포진행기인전이적방법.통과대HepG2세포적실험결과현시,장대독Sf9세포배양상청(1.2×107PFU/mL)용포유동물세포배양기1배희석후,37℃하부육파세포12h(moi=50),가체도교고적기인전이급표체효솔,동시불회대세포조성명현손상.장중조간상병독여지질체화역전록병독저량충계통대HepG2급CV1세포적기인전이효솔진행료비교,결과발현재동양미경농축등특수처리적조건하중조간상병독대저량충세포적기인전이효솔시최고적.인차가이인위,경과괄당개조후적Bac-to-Bac중조간상병독계통가작위일충대포유동물세포간편고효적기인전이표체재체.