CAJ | 학술논문

目的探讨NT-3基因转染对豚鼠庆大霉素耳中毒的保护作用.方法采用阳离子脂质体介导的方法,将携带外源性基因NT-3的重组质粒pIRES2-EGFP-NT-3与阳离子脂质体复合物10 μl注入豚鼠左侧耳蜗(设为Ⅰ组),术后3 d开始给予庆大霉素肌肉注射(120 mg/kg),连续注射14 d,分别于停药后1 d、2 w进行ABR及DPOAE测试,随即处死动物,耳蜗取材,观察耳蜗毛细胞受损情况,并在透射电镜下观察耳蜗传入神经超微结构改变.实验同时设空载体组(Ⅱ组)及正常对照组(Ⅲ组).结果庆大霉素停药1 d时,与正常对照组相比,空载体组DPOAE幅值显著下降(P<0.05), 停药2 w时,DPOAE幅值下降更显著,尤其在1、1.4及6 kHz处幅值下降明显(P<0.05);NT-3转染组在停药1 d时,仅高频DPOAE幅值下降(P<0.05),停药2 w时,DPOAE幅值下降减缓(P>0.05);各实验组ABR阈值与DPOAE幅值改变相似;荧光显微镜下见庆大霉素停药1 d时,NT-3转染组第一排外毛细胞出现部分缺失,庆大霉素停药2 w时,第一排外毛细胞缺失加重,并出现少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失;空载体组在庆大霉素停药1 d时,即出现第一排外毛细胞严重缺失,少量第二、三排外毛细胞及个别内毛细胞的缺失,停药2 w时外毛细胞缺失进一步加重;透射电镜下见庆大霉素停药1 d时,空载体对照组Ⅰ型及Ⅱ型神经纤维轴索内微管排列出现紊乱,少量崩解,髓鞘板层结构尚可,Ⅰ、Ⅱ型神经元细胞胞体内偶可见少量髓鞘样结构,停药2 w时,传入神经退行性改变明显加重,神经纤维崩解,神经元出现大量空泡化.而NT-3转染组在损伤的早期,传入性神经从末梢到神经元仅出现轻微的改变,在庆大霉素停药2 w时,神经退行性改变略加重,但仍显著轻于对照组.结论阳离子脂质体介导的NT-3基因转染可减轻庆大霉素对豚鼠耳蜗外毛细胞、传入神经及螺旋神经节细胞的毒性作用. 目的探討NT-3基因轉染對豚鼠慶大黴素耳中毒的保護作用.方法採用暘離子脂質體介導的方法,將攜帶外源性基因NT-3的重組質粒pIRES2-EGFP-NT-3與暘離子脂質體複閤物10 μl註入豚鼠左側耳蝸(設為Ⅰ組),術後3 d開始給予慶大黴素肌肉註射(120 mg/kg),連續註射14 d,分彆于停藥後1 d、2 w進行ABR及DPOAE測試,隨即處死動物,耳蝸取材,觀察耳蝸毛細胞受損情況,併在透射電鏡下觀察耳蝸傳入神經超微結構改變.實驗同時設空載體組(Ⅱ組)及正常對照組(Ⅲ組).結果慶大黴素停藥1 d時,與正常對照組相比,空載體組DPOAE幅值顯著下降(P<0.05), 停藥2 w時,DPOAE幅值下降更顯著,尤其在1、1.4及6 kHz處幅值下降明顯(P<0.05);NT-3轉染組在停藥1 d時,僅高頻DPOAE幅值下降(P<0.05),停藥2 w時,DPOAE幅值下降減緩(P>0.05);各實驗組ABR閾值與DPOAE幅值改變相似;熒光顯微鏡下見慶大黴素停藥1 d時,NT-3轉染組第一排外毛細胞齣現部分缺失,慶大黴素停藥2 w時,第一排外毛細胞缺失加重,併齣現少量第二、三排外毛細胞及箇彆內毛細胞的缺失;空載體組在慶大黴素停藥1 d時,即齣現第一排外毛細胞嚴重缺失,少量第二、三排外毛細胞及箇彆內毛細胞的缺失,停藥2 w時外毛細胞缺失進一步加重;透射電鏡下見慶大黴素停藥1 d時,空載體對照組Ⅰ型及Ⅱ型神經纖維軸索內微管排列齣現紊亂,少量崩解,髓鞘闆層結構尚可,Ⅰ、Ⅱ型神經元細胞胞體內偶可見少量髓鞘樣結構,停藥2 w時,傳入神經退行性改變明顯加重,神經纖維崩解,神經元齣現大量空泡化.而NT-3轉染組在損傷的早期,傳入性神經從末梢到神經元僅齣現輕微的改變,在慶大黴素停藥2 w時,神經退行性改變略加重,但仍顯著輕于對照組.結論暘離子脂質體介導的NT-3基因轉染可減輕慶大黴素對豚鼠耳蝸外毛細胞、傳入神經及螺鏇神經節細胞的毒性作用.
목적탐토NT-3기인전염대돈서경대매소이중독적보호작용.방법채용양리자지질체개도적방법,장휴대외원성기인NT-3적중조질립pIRES2-EGFP-NT-3여양리자지질체복합물10 μl주입돈서좌측이와(설위Ⅰ조),술후3 d개시급여경대매소기육주사(120 mg/kg),련속주사14 d,분별우정약후1 d、2 w진행ABR급DPOAE측시,수즉처사동물,이와취재,관찰이와모세포수손정황,병재투사전경하관찰이와전입신경초미결구개변.실험동시설공재체조(Ⅱ조)급정상대조조(Ⅲ조).결과경대매소정약1 d시,여정상대조조상비,공재체조DPOAE폭치현저하강(P<0.05), 정약2 w시,DPOAE폭치하강경현저,우기재1、1.4급6 kHz처폭치하강명현(P<0.05);NT-3전염조재정약1 d시,부고빈DPOAE폭치하강(P<0.05),정약2 w시,DPOAE폭치하강감완(P>0.05);각실험조ABR역치여DPOAE폭치개변상사;형광현미경하견경대매소정약1 d시,NT-3전염조제일배외모세포출현부분결실,경대매소정약2 w시,제일배외모세포결실가중,병출현소량제이、삼배외모세포급개별내모세포적결실;공재체조재경대매소정약1 d시,즉출현제일배외모세포엄중결실,소량제이、삼배외모세포급개별내모세포적결실,정약2 w시외모세포결실진일보가중;투사전경하견경대매소정약1 d시,공재체대조조Ⅰ형급Ⅱ형신경섬유축색내미관배렬출현문란,소량붕해,수초판층결구상가,Ⅰ、Ⅱ형신경원세포포체내우가견소량수초양결구,정약2 w시,전입신경퇴행성개변명현가중,신경섬유붕해,신경원출현대량공포화.이NT-3전염조재손상적조기,전입성신경종말소도신경원부출현경미적개변,재경대매소정약2 w시,신경퇴행성개변략가중,단잉현저경우대조조.결론양리자지질체개도적NT-3기인전염가감경경대매소대돈서이와외모세포、전입신경급라선신경절세포적독성작용.