CAJ | 학술논문

目的建立16SrDNA结合显色法芯片技术(玻璃芯片转尼龙膜显色法)鉴定分枝杆菌的方法. 方法利用GenBank中细菌16SrDNA保守区序列,设计两对分枝杆菌属特异性通用引物,采用双重PCR法同时扩增16SrDNA的2个不同片段;根据已知16种分枝杆菌的16SrDNA序列,设计合成对应的特异性寡核苷酸探针.先用通用引物PCR扩增所有标准菌株DNA,PCR产物分别与16种分枝杆菌探针的玻璃芯片杂交,通过尼龙膜显色进行分析. 结果应用显色法芯片技术分析16种分枝杆菌标准菌株和5种非分枝杆菌菌株,对其双重PCR、杂交、洗涤条件进行优化.确定双重PCR最佳退火温度为52 ℃,在该温度下除5株非分枝杆菌外均产生2条DNA片段,大小分别为272～280 bp和183～192 bp;杂交温度32 ℃、2×SSC洗涤5min、0.2×SSC洗涤1 min,16种分枝杆菌的杂交效果最好,特异性达100%. 结论用显色芯片法检测16SrDNA,可准确鉴别16种分枝杆菌.
목적 건립16SrDNA결합현색법심편기술(파리심편전니룡막현색법)감정분지간균적방법. 방법 이용GenBank중세균16SrDNA보수구서렬,설계량대분지간균속특이성통용인물,채용쌍중PCR법동시확증16SrDNA적2개불동편단;근거이지16충분지간균적16SrDNA서렬,설계합성대응적특이성과핵감산탐침.선용통용인물PCR확증소유표준균주DNA,PCR산물분별여16충분지간균탐침적파리심편잡교,통과니룡막현색진행분석. 결과 응용현색법심편기술분석16충분지간균표준균주화5충비분지간균균주,대기쌍중PCR、잡교、세조조건진행우화.학정쌍중PCR최가퇴화온도위52 ℃,재해온도하제5주비분지간균외균산생2조DNA편단,대소분별위272～280 bp화183～192 bp;잡교온도32 ℃、2×SSC세조5min、0.2×SSC세조1 min,16충분지간균적잡교효과최호,특이성체100%. 결론 용현색심편법검측16SrDNA,가준학감별16충분지간균.