重庆医科大学学报
重慶醫科大學學報
중경의과대학학보
UNIVERSITATIS SCIENTIAE MEDICINAE CHONGQING
2010年
8期
1145-1148
,共4页
RNA干扰%livin%胶质瘤细胞
RNA榦擾%livin%膠質瘤細胞
RNA간우%livin%효질류세포
目的:通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)阻断胶质瘤U251细胞中livin基因的表达,研究livin基因沉默后对细胞生长和细胞凋亡的影响.方法:将合成的DNA正义链及反义链变性、退火,形成的双链DNA与pSilencer2.0线性质粒以T4DNA连接酶连接,重组质粒经酶切鉴定后,用脂质体法转染胶质瘤U251细胞,通过RT-PCR、免疫印迹检测干扰效果.MTT法检测细胞生长的影响,流式细胞仪检测转染后胶质瘤U251细胞的凋亡变化.结果:酶切证实设计合成的DNA片段已正确插入载体.RT-PCR、免疫印迹检测实验表明:pSilencer2.0-liv1、pSilencer2.0-liv2重组载体均能有效地阻断胶质瘤U251细胞中livin基因的表达,使livin基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P<0.01),后者抑制效果更佳.转染后的U251细胞生长速度明显变慢.转染pSilencer2.0-1iv2实验组细胞的凋亡增加了17.0%.结论:重组真核载体能有效抑制U251细胞的livin表达,抑制细胞的增殖,诱导细胞凋亡.
目的:通過RNA榦擾(RNA interference,RNAi)阻斷膠質瘤U251細胞中livin基因的錶達,研究livin基因沉默後對細胞生長和細胞凋亡的影響.方法:將閤成的DNA正義鏈及反義鏈變性、退火,形成的雙鏈DNA與pSilencer2.0線性質粒以T4DNA連接酶連接,重組質粒經酶切鑒定後,用脂質體法轉染膠質瘤U251細胞,通過RT-PCR、免疫印跡檢測榦擾效果.MTT法檢測細胞生長的影響,流式細胞儀檢測轉染後膠質瘤U251細胞的凋亡變化.結果:酶切證實設計閤成的DNA片段已正確插入載體.RT-PCR、免疫印跡檢測實驗錶明:pSilencer2.0-liv1、pSilencer2.0-liv2重組載體均能有效地阻斷膠質瘤U251細胞中livin基因的錶達,使livin基因在mRNA和蛋白水平上的錶達明顯下調(P<0.01),後者抑製效果更佳.轉染後的U251細胞生長速度明顯變慢.轉染pSilencer2.0-1iv2實驗組細胞的凋亡增加瞭17.0%.結論:重組真覈載體能有效抑製U251細胞的livin錶達,抑製細胞的增殖,誘導細胞凋亡.
목적:통과RNA간우(RNA interference,RNAi)조단효질류U251세포중livin기인적표체,연구livin기인침묵후대세포생장화세포조망적영향.방법:장합성적DNA정의련급반의련변성、퇴화,형성적쌍련DNA여pSilencer2.0선성질립이T4DNA련접매련접,중조질립경매절감정후,용지질체법전염효질류U251세포,통과RT-PCR、면역인적검측간우효과.MTT법검측세포생장적영향,류식세포의검측전염후효질류U251세포적조망변화.결과:매절증실설계합성적DNA편단이정학삽입재체.RT-PCR、면역인적검측실험표명:pSilencer2.0-liv1、pSilencer2.0-liv2중조재체균능유효지조단효질류U251세포중livin기인적표체,사livin기인재mRNA화단백수평상적표체명현하조(P<0.01),후자억제효과경가.전염후적U251세포생장속도명현변만.전염pSilencer2.0-1iv2실험조세포적조망증가료17.0%.결론:중조진핵재체능유효억제U251세포적livin표체,억제세포적증식,유도세포조망.
