中国病理生理杂志
中國病理生理雜誌
중국병리생리잡지
CHINESE JOURNAL OF PATHOPHYSIOLOGY
2011年
9期
1790-1795
,共6页
李红阳%李晓霞%余榕捷%刘晓飞%王静静%苏航%陈建苏
李紅暘%李曉霞%餘榕捷%劉曉飛%王靜靜%囌航%陳建囌
리홍양%리효하%여용첩%류효비%왕정정%소항%진건소
Oct4%诱导全能干细胞
Oct4%誘導全能榦細胞
Oct4%유도전능간세포
目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4.方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至E.coli ER2566.镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定.用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性.结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力.结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础.
目的:重組蛋白構建細胞轉錄因子PTD-Oct4.方法:利用重疊延伸PCR法重組目的基因構建質粒pKYB-PTD-Oct4,併轉染至E.coli ER2566.鎳柱純化重組蛋白併用Western bloting對其進行鑒定.用異硫氰痠熒光素(FITC)標記PTD-Oct4,檢測其穿透中國倉鼠卵巢(CHO)細胞膜的能力;用熒光共振能量轉移(FRET)檢測重組融閤蛋白PTD-Oct4結閤目的DNA的活性.結果:成功穫得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功進入細胞,定位于細胞覈內,穿膜效率為(28.3±2.4)%,併具有與目標DNA序列特異結閤的能力.結論:製備重組PTD-Oct4為外源蛋白誘導多能榦細胞(IPSCs)奠定基礎.
목적:중조단백구건세포전록인자PTD-Oct4.방법:이용중첩연신PCR법중조목적기인구건질립pKYB-PTD-Oct4,병전염지E.coli ER2566.얼주순화중조단백병용Western bloting대기진행감정.용이류청산형광소(FITC)표기PTD-Oct4,검측기천투중국창서란소(CHO)세포막적능력;용형광공진능량전이(FRET)검측중조융합단백PTD-Oct4결합목적DNA적활성.결과:성공획득목적단백PTD-Oct4,기가이성공진입세포,정위우세포핵내,천막효솔위(28.3±2.4)%,병구유여목표DNA서렬특이결합적능력.결론:제비중조PTD-Oct4위외원단백유도다능간세포(IPSCs)전정기출.
