农业现代化研究
農業現代化研究
농업현대화연구
RESEARCH OF AGRICULTURAL MODERNIZATION
2011年
6期
756-760
,共5页
傅德智%孔祥峰%杨焕胜%褚武英%李铁军%印遇龙
傅德智%孔祥峰%楊煥勝%褚武英%李鐵軍%印遇龍
부덕지%공상봉%양환성%저무영%리철군%인우룡
藏猪%兴奋性氨基酸转运载体%序列分析%原核表达
藏豬%興奮性氨基痠轉運載體%序列分析%原覈錶達
장저%흥강성안기산전운재체%서렬분석%원핵표체
兴奋性氨基酸转运载体EAAC1是肠道内谷氨酸的主要载体.本研究根据人的基因编码区设计一对特异性引物,以藏猪空肠总RNA为模板,通过RT-PCR获得一长约1600 bp的cDNA片段,T/A克隆后测序,并进行序列分析；将该基因片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中构建融合表达质粒,转化到E.coli BL21(DE3)中进行表达.测序结果显示,获得的cDNA全长为1575 bp,编码524个氨基酸；EAAC1分子量为57 kD,等电点为5.34,GenBank登录号为GQ375513;该蛋白质具有3个N-糖基化位点、8个蛋白激酶C磷酸化位点和1个cAMP/cGMP依赖性蛋白激酶磷酸化位点,含有7个跨膜结构域和一个信号肽序列；SDS-PAGE电泳检测结果表明,表达蛋白质与预期蛋白质大小一致.上述结果为进一步研究EAAC1的功能及其调控奠定了基础.
興奮性氨基痠轉運載體EAAC1是腸道內穀氨痠的主要載體.本研究根據人的基因編碼區設計一對特異性引物,以藏豬空腸總RNA為模闆,通過RT-PCR穫得一長約1600 bp的cDNA片段,T/A剋隆後測序,併進行序列分析；將該基因片段連接到原覈錶達載體pET-32a(+)中構建融閤錶達質粒,轉化到E.coli BL21(DE3)中進行錶達.測序結果顯示,穫得的cDNA全長為1575 bp,編碼524箇氨基痠；EAAC1分子量為57 kD,等電點為5.34,GenBank登錄號為GQ375513;該蛋白質具有3箇N-糖基化位點、8箇蛋白激酶C燐痠化位點和1箇cAMP/cGMP依賴性蛋白激酶燐痠化位點,含有7箇跨膜結構域和一箇信號肽序列；SDS-PAGE電泳檢測結果錶明,錶達蛋白質與預期蛋白質大小一緻.上述結果為進一步研究EAAC1的功能及其調控奠定瞭基礎.
흥강성안기산전운재체EAAC1시장도내곡안산적주요재체.본연구근거인적기인편마구설계일대특이성인물,이장저공장총RNA위모판,통과RT-PCR획득일장약1600 bp적cDNA편단,T/A극륭후측서,병진행서렬분석；장해기인편단련접도원핵표체재체pET-32a(+)중구건융합표체질립,전화도E.coli BL21(DE3)중진행표체.측서결과현시,획득적cDNA전장위1575 bp,편마524개안기산；EAAC1분자량위57 kD,등전점위5.34,GenBank등록호위GQ375513;해단백질구유3개N-당기화위점、8개단백격매C린산화위점화1개cAMP/cGMP의뢰성단백격매린산화위점,함유7개과막결구역화일개신호태서렬；SDS-PAGE전영검측결과표명,표체단백질여예기단백질대소일치.상술결과위진일보연구EAAC1적공능급기조공전정료기출.
