重庆医学
重慶醫學
중경의학
CHONGQING MEDICAL JOURNAL
2012年
12期
1200-1202,封2,后插1
,共5页
罗红春%张红宾%秦波%汪嘉莉%刘倩
囉紅春%張紅賓%秦波%汪嘉莉%劉倩
라홍춘%장홍빈%진파%왕가리%류천
基质细胞衍生因子-1%RUNX1基因%间充质干细胞%造血干细胞
基質細胞衍生因子-1%RUNX1基因%間充質榦細胞%造血榦細胞
기질세포연생인자-1%RUNX1기인%간충질간세포%조혈간세포
目的 构建SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,并测定其滴度,为研究SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞定向募集的作用打下基础.方法 全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段,并在其两端添加限制性酶切位点XhoI及EcoRI,经测序验证基因序列是否正确.采用分子克隆技术构建pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体,转染入293A细胞中进行包装,采用免疫法测定腺病毒滴度.结果 全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段经测序验证基因序列正确,长约3 000 bp.将其连接至目的 载体pIRES2-EGFP,构建出含有SDF-1-(GlySer)3-RUNX1基因序列的GFP共表达质粒编号为B.以B质粒为模板,扩增出带attB1和attB2位点的SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP片段,长约4 300 bp.采用BP重组系统将上述目的 片段重组到载体pDONR221,构建出BP重组质粒C.再采用LR重组系统将目的 序列重组到腺病毒载体pAD/CMV/v5-DEST上,构建出pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体.经293细胞包装后,采用免疫法测定腺病毒滴度为1.03×1011 ifu/mL.结论 成功构建出SDF-11/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,且腺病毒滴度较高,有利于后续试验.
目的 構建SDF-1/RUNX1融閤蛋白腺病毒錶達載體,併測定其滴度,為研究SDF-1/RUNX1融閤蛋白介導的間充質榦細胞對造血榦細胞定嚮募集的作用打下基礎.方法 全基因閤成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段,併在其兩耑添加限製性酶切位點XhoI及EcoRI,經測序驗證基因序列是否正確.採用分子剋隆技術構建pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒載體,轉染入293A細胞中進行包裝,採用免疫法測定腺病毒滴度.結果 全基因閤成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段經測序驗證基因序列正確,長約3 000 bp.將其連接至目的 載體pIRES2-EGFP,構建齣含有SDF-1-(GlySer)3-RUNX1基因序列的GFP共錶達質粒編號為B.以B質粒為模闆,擴增齣帶attB1和attB2位點的SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP片段,長約4 300 bp.採用BP重組繫統將上述目的 片段重組到載體pDONR221,構建齣BP重組質粒C.再採用LR重組繫統將目的 序列重組到腺病毒載體pAD/CMV/v5-DEST上,構建齣pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒載體.經293細胞包裝後,採用免疫法測定腺病毒滴度為1.03×1011 ifu/mL.結論 成功構建齣SDF-11/RUNX1融閤蛋白腺病毒錶達載體,且腺病毒滴度較高,有利于後續試驗.
목적 구건SDF-1/RUNX1융합단백선병독표체재체,병측정기적도,위연구SDF-1/RUNX1융합단백개도적간충질간세포대조혈간세포정향모집적작용타하기출.방법 전기인합성SDF-1-(GlySer)3-RUNX1편단,병재기량단첨가한제성매절위점XhoI급EcoRI,경측서험증기인서렬시부정학.채용분자극륭기술구건pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP선병독재체,전염입293A세포중진행포장,채용면역법측정선병독적도.결과 전기인합성SDF-1-(GlySer)3-RUNX1편단경측서험증기인서렬정학,장약3 000 bp.장기련접지목적 재체pIRES2-EGFP,구건출함유SDF-1-(GlySer)3-RUNX1기인서렬적GFP공표체질립편호위B.이B질립위모판,확증출대attB1화attB2위점적SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP편단,장약4 300 bp.채용BP중조계통장상술목적 편단중조도재체pDONR221,구건출BP중조질립C.재채용LR중조계통장목적 서렬중조도선병독재체pAD/CMV/v5-DEST상,구건출pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP선병독재체.경293세포포장후,채용면역법측정선병독적도위1.03×1011 ifu/mL.결론 성공구건출SDF-11/RUNX1융합단백선병독표체재체,차선병독적도교고,유리우후속시험.
